英语论文
原创论文
留学生作业
英语论文格式
免费论文
essay
英国硕士论文
英国毕业论文
英语论文
留学生论文
澳大利亚论文
新西兰论文
澳洲Report
澳洲留学生论文
美国留学论文
Dissertation
美国硕博论文
essay case
Eassy
Term paper
英语毕业论文
英文论文
课程作业
德语论文
德语专业论文
德语本科论文
德国留学论文
Assignment
日语论文
韩语论文
法语论文
俄语论文

不同浓度硫酸分化液对耐酸染色效果的比较

时间:2022-09-29 来源:未知 编辑:梦想论文 阅读:
摘要:目的:在病理组织抗酸染色实验中,采用硫酸和盐酸对染色结果进行评价,以获得最佳染色方法。方法:采用硫酸分化液和盐酸分化液,比较已知含有结核分枝杆菌的病理组织石蜡切片的染色效果。结果:用0.5%盐酸分化液,分化时间为6s时,染色效果优于硫酸分化液。
 
关键词
 
耐酸染色、硫酸、分化液、染色效果、盐酸

1.简介
 
结核病是一种全身性慢性传染病。近年来,其发病率在全世界呈上升趋势,引起了世界卫生组织的关注[1][2][3]。结核分枝杆菌(TB)是导致这种疾病的病原体,主要侵犯肺部、淋巴结和肾脏。在显微镜下,大多数是细长弯曲的杆,长度不均匀,分散的单杆或平行簇,有时分支[4][5][6]。目前常用的结核病检测方法有Ziehl Neelsen抗酸染色、实时荧光定量PCR和ISH等。虽然目前组织病理学已发展到分子病理学,但许多疾病可以通过免疫组织化学和分子生物学技术进行诊断,抗酸染色在临床病理诊断中仍占有重要地位,其优点是高效、经济[7]。结果表明,抗酸杆菌的传统染色方法是Ziehl-Neelsen法,即用碱性品红和苯酚进行染色,然后Wade Fite在此基础上进行了改进。本文采用硫酸溶液和盐酸溶液对耐酸杆菌进行区分,使染色结果更清晰,对比度更尖锐。
 
2.实验方法
 
实验材料:收集2018年12月至2020年11月中山大学第七附属医院病理科病例,选取10例已知含有结核分枝杆菌的病理组织,经固定脱水制成组织蜡块。
 
主要仪器设备:脱水机(HP300,中国达科他州)、医用冰箱(HYC-356,青岛海尔)、切片机(RM2235,德国徕卡)、烤箱(BPG-9070A,上海恒科仪器有限公司)、湿箱。
 
实验试剂:TO生物透明剂、苯酚碱性品红、0.5%硫酸溶液、0.5%盐酸溶液、迈尔苏木精、二甲苯、中性胶。
 
实验方法:将10例蜡块连续切成2片,随机分为A组和C组,分别用0.5%盐酸溶液和0.5%硫酸溶液对应A组和C组。
 
耐酸染色的实验步骤
 
1) 将病理石蜡切片,厚度为5 um,放入烤箱中烤60分钟;
 
2) 将切片放入两个TO生物透明剂筒中,每个筒脱蜡20分钟;
 
3) 用吸水纸轻轻吸收玻片上的活性剂,将其放入80℃的热水中,上下提起10次以上;
 
4) 用自来水冲洗10分钟;
 
5) 加入苯酚碱性品红20分钟,放入培养箱中,注意不要干燥;
 
6) 将0.5%盐酸溶液和0.5%硫酸溶液分别滴入A组和C组6秒;
 
7) 用自来水冲洗10分钟;

8) 迈耶苏木素染色1分钟;宠物名红宝石水冲洗10分钟;烘箱干燥20分钟,透明二甲苯,用中性胶密封。
 
3.评分标准
 
双盲计分,得10分;抗酸杆菌阳性染色程度强,结构清晰,与周围组织对比强烈,背景干净,每项指标10分;切片组织染色效果一般,但不影响诊断,扣1-3分;切片组织染色效果差,结构模糊,对诊断有一定影响的,扣4-7分;如果染色效果很差,组织结构无法识别,严重影响诊断结果,扣8-10分。
 
4.统计处理
 
所有统计处理均在SPSS13.0软件中进行。用方差齐性分析A组和C组的得分,并用T检验选择两个独立样本进行比较。检验水平为α=0.05,P<0.05被视为具有统计学意义的标准。
 
5.结果
 
A组得分(9.20+0.79);C组得分(0.50+0.53);0.5%盐酸溶液的耐酸染色效果明显优于0.5%硫酸溶液,阳性度强,结构清晰,背景干净,差异有统计学意义(t=−10.077,P<0.005)(图1和图2)。
 
6.讨论
 
抗酸杆菌的细胞壁含有脂类,糖脂与酚碱性品红结合形成化合物,形成蜡状外壳。这
 
图1.A组中0.5%盐酸分化液分化6s,箭头为结核分枝杆菌(标度100μm)。
 
图2 C组:0.5%硫酸分化液,分化6s(刻度100μm)。
 
化合物与细菌结合后能抵抗酸的脱色,使耐酸杆菌呈红色。苯酚作为媒染剂,能促进细菌与碱性品红的结合,有助于碱性品红溶解。盐酸和硫酸是分化溶液,可以对其他组织进行脱色,而不会对染色后的抗酸细菌进行脱色[8][9]。结核呈小杆状,抗酸染色,需在100×高倍显微镜下观察。有时,肺结核病灶很少见。因此,染色的阳性程度和清晰的背景对比度对临床诊断至关重要。在本实验中,作者做了以下改进:
 
1) 常规石蜡切片为3um,但结核分枝杆菌染色厚度为5um。由于切片太薄,结核分枝杆菌会被切碎,在显微镜下会变成碎屑,不利于观察和判断;

2) 在本实验中,对生物剂松节油进行脱蜡,然后用温水清洗。与传统的二甲苯脱蜡法相比,它能更好地保存结核分枝杆菌。抗酸杆菌的耐酸性来自其脂质细胞壁。二甲苯和乙醇可以溶解脂质,破坏细胞壁,导致抗酸杆菌减少甚至消失。
 
3) 选择合适的鉴别溶液,严格控制鉴别时间。在传统操作中,硫酸溶液常被用作抗酸菌染色试剂盒中的分化剂。然而,在实际操作中,发现分化时间不易控制,整个病理切片仅分化几秒钟后就变白,显微镜下观察到的抗酸菌阳性率极低。因此,本实验使用0.5%盐酸分化液,时间控制在6s,以便在显微镜下观察分化状态,获得最佳的抗酸菌染色程度。
 
7.结论
 
与A组和C组的实验结果相比,发现用0.5%硫酸溶液鉴别组织切片的时间太快,而且很难掌握操作,常常导致分化过度,阳性程度减弱,甚至影响诊断结果。用0.5%盐酸溶液进行分化,时间易于控制,有足够的时间在显微镜下观察分化程度,并在适当的时间停止,使染色阳性程度更强,组织结构对比清晰,更有利于显微镜诊断。
 
利益冲突
 
作者声明,本论文的出版不存在利益冲突。
 
工具书类
 
[1] Li,X.,Qing,Q.和Li,D.F.(2015)荧光染色和钐-尼罗河染色在检测结核分枝杆菌中的效果评估。国际实验室医学杂志,36745-746。
 
[2] Wang,D.T.和Dong,J.Q.(2012)《实用现代病理技术》。北京协和医科大学出版社,北京,133-134。
 
[3] Yin,C.L.,Zhou,L.R.和Liu,Y.(2016)介绍了一种改进的耐酸杆菌染色方法。中国诊断病理学杂志,23,554-555。
 
[4] Xue,X.W.,Wang,D.T.,Li,X.Q.,et al.(2013)环保试剂与传统试剂冷冻干燥效果的比较。中国诊断病理学杂志,20512页。
 
[5] Kevin,Z,Hu,Z.J.和Zhang,C.L.等(2016)基底膜染色方法比较及其在胃发育不良和胃腺癌中的应用。中国组织化学与细胞化学杂志,25169-173。
 
[6] Liang,Y.J.,Ling,Q.B.和Wei,Z.(2011)《临床病理技术》。人民医学出版社,北京,116-118。
 
[7] Yang,Q.L.(1991)硫酸-乙醇法合成硫酸二乙酯。辽宁化工,22,22-24。

分享到:
------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
最新评论
随机推荐免费论文