摘要：在研究中，评估了 25 种木质营养微菌的 103 株导致白色腐烂的菌株，这些菌株在阿塞拜疆的生态不同地区传播，用于合成酚氧化酶（漆酶、过氧化物酶和木质素酶）。经测定，属于单色侧柏、平菇、裂叶菌和杂色栓菌等物种的菌株合成酚氧化酶更为活跃，该过程通常以诱导方式发生。尽管如此，与经典的诱导酶不同，担子菌中酚氧化酶的基础水平要高得多，这可以表征为木质营养大型菌群适应木质基质的迹象。
关键词
木质营养微菌,白 衰变,酚 氧化 酶,统一 理论;
一、简介
众所周知，蘑菇是特别关注的研究对象之一，例如生物活性物质，以及具有不同作用的酶的生产者[ 1 ]。因此，催化在光合作用产生的绿色生物质中形成的聚合物（如纤维素、木质素和半纤维素）退化的酶的合成引起了他们的兴趣 [ 2 ] [ 3 ]。在这方面，发现这些酶的活性生产者的研究阐明了酶合成的一些问题 [ 4 ] [ 5]，一些成果甚至被应用到了工业上。然而，在这个方向研究的真菌只占已知真菌的一小部分，与某些酶的合成调节有关的一些问题尚未阐明 [ 6 ] [ 7 ] 以及具有高生物活性的生产者在今天是少数.
蘑菇是每个存在有机物并在那里发挥各种功能的生态系统的永久组成部分，更准确地说，蘑菇是生态系统中发生的所有过程（生产、破坏、安排和指示）的积极参与者 [ 8 ]。在实践中使用这些蘑菇的基础是它们积极参与这些功能 [ 9 ]。除了蘑菇在自然界中所发挥的多种功能外，它们在自然界中形成的生态群也具有种类繁多的特点，其中一些针对实践的特征与这一群有关。蘑菇的生态群之一是木营养菌，它们的主要栖息地和觅食区是木本植物（树木，以及一些灌木）[2 ] [ 5 ] [ 10 ]。
尽管没有关于木质营养大型菌数量的准确文献信息，但可以注意到大约有 1000 种蘑菇具有这种特征。它们的主要分布区域是天然和人工林 [ 11 ]、绿地、花园和公园。
上述所有物种均在阿塞拜疆共和国境内发现，在这些地区的树木和灌木中发现了 212 种木质营养大型菌类 [ 4 ] [ 12 ] [ 13 ]]。阐明了一些蘑菇合成水解酶和氧化酶的问题，以及作为活性生产者选择蘑菇的合成调控。菌株水平的活性指标是可变的，这或其他生产者所特有的，在这些酶的催化活性中也参与了类似情况，因此有必要研究这些蘑菇。考虑到这一点，所提出的工作致力于通过酚氧化酶、更准确的漆酶、过氧化物酶和木质素等酶的活性来评估在阿塞拜疆自然传播的木营养大型菌。在研究中，仅选择酚氧化酶与以下事实有关，
二、材料与方法
研究从2016年开始，研究样本已覆盖阿塞拜疆所有主要地貌单元（大高加索—GC、库拉阿拉兹低地—KA、塔利什山脉—TM和小高加索—SG）（图1）。
根据已知方法以及先前研究中使用的方法进行采样、初始通行证和实验室分析准备工作 [ 4 ] [ 13 ]。研究区域的例子取自树木和手臂，只是因为它们的重要形状。采样按照路线和永久观察区（100 m×100 m）的方法进行。
图 1。调查区域概览。1—大高加索地区；2—库拉阿拉兹低地；3 - 塔利什山脉和 4 - 小高加索。
在蘑菇的鉴定过程中，根据蘑菇的形态学、文化学和生理学症状使用制备的行列式 [ 14 ] [ 15 ]。
在分离培养物的培养过程中，在液体营养培养基中进行初始培养，用于此目的的营养培养基的含量为：葡萄糖—10；蛋白胨——3；NH 4 NO 3 —1.5；氯化钠——0.5；MgSO 4 ∙7H 2 O; K 2 HPO 3 —0.4；FeSO 4 ——少量，普通水——1L。灭菌条件——0.5atm，0.5小时，灭菌后环境酸度5.5-5.7。作为主要播种材料，使用从在标准营养培养基中培养的蘑菇培养物菌落中提取的二次粒子。将这样得到的生物质用磁力搅拌机切成小块作为播种材料。
通过分光光度法测定酚氧化酶的活性。在研究过程中，为了测定作为底物的过氧化物酶和漆酶的活性，使用 1% 的羟基酮溶液，酶的活性由加入培养液 (CS) 后在 240 nm 波长处的光密度变化来确定。那个基板。在测定过氧化物酶活性时，除了反应混合物外，还加入 H 2 O 2。在测定木质素酶活性期间，使用 2% 藜芦醇。在确定酶的非细胞和细胞内活性期间，使用了我们之前工作中使用的方法。
在发酵活性的测定中，蛋白质的量采用分光光度法进行[ 16 ]。
所有实验均进行了 4-6 次重复，并对所得结果进行了统计处理 [ 17 ]。在所有情况下，对应于公式 m/M = P ≤ 0.05 的结果被认为是诚实的，并包含在论文中。这里，M——是重复的平均价格，m——是中方位错中方位移，P——是置信水平。
三、结果与讨论
为了实现研究的目标，我们将在位于阿塞拜疆不同生态区的天然森林生态系统中传播的纯培养木营养大型菌进行了收集，并创建了它们的集合。结果，从 103 个菌株中创建了一个集合，它们的物种特异性、区域分布和底物隶属关系的特征如表 1所示。如所见，登记菌株属于25种木营养大型菌，但在阿塞拜疆不同生态地区的传播能力和底物态度存在一定差异。诚然，虽然它们中的大多数属于 evritropes，但其中有符合条件的 stenotroph。
关于表的问题，应该注意一个问题。如所见，用于菌株的分离物主要来自木质营养大型菌的子实体，在自然条件下会导致白色腐烂。其原因的特征在于能够在自然条件下对木质营养大型菌类的纤维素和木质素的降解进行主动实现，从而导致白色腐烂。更具体地说，由于氧化酶和水解酶都参与了它们的酶系统，因此研究所需的菌株与它们分离。
从为评估分离菌株合成酚氧化酶的能力而进行的研究中清楚地表明，所有测试菌株都具有有效合成在此或那个程度上研究的酶的能力（表 2），但它们之间的区别在于活动水平。例如，如果蘑菇 Ganoderma applanatum S-17 中漆酶、过氧化物酶和木质素酶的活性分别为 70.6、50.3 和 58.9 ui/ml，则在虎皮香菇 FS-28 中的类似指示为 60.5、45.3 和 54.5 ui /毫升。在其他真菌中也观察到类似的差异。
尽管存在这些差异，但基于单一生物量计算的蘑菇（如 Cerena unicols、Pleurotus ostreatus、Schizophyllium commune 和 Trametes versicolor）中的活性高于其他蘑菇。例如，在Bjerkandera adusta P-40 10.2 g/l中，漆酶、过氧化物酶和木质素酶的活性分别为85.1 ui/ml、62.2 ui/ml和58.3 ui/ml。酶的单位
| № | 被分离菌株的真菌种类 | 分离株数 | 物种分布的地貌单元及其与基质的关系 |
| 1 | 蜜环菌 | 4 | GC、SC、TM、肥大 |
| 2 | Bjerkandera adusta | 5 | GC、SC、TM、肥大 |
| 3 | Cerena 单色 | 5 | GC、SC、TM、肥大 |
| 4 | 槲寄生代达利亚 | 3 | GC, SC, TM, 条件性狭窄 |
| 5 | 大白菊 | 3 | GC, SC, TM, 条件性狭窄 |
| 6 | 金针菇 | 3 | GC, SC, TM, 条件性狭窄 |
| 7 | 大肠炎 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 8 | 灵芝 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 9 | 灵芝 | 4 | GC, TM, 肥大 |
| 10 | 异孔菌 | 3 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 11 | 香菇 | 4 | GC、SC、TM、肥大 |
| 12 | 虎斑乳杆菌 | 3 | GC、SC、TM、肥大 |
| 13 | Lenzitez 桦木 | 4 | GC、SC、TM、肥大 |
| 14 | 桑黄 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 15 | 鲭鱼 | 4 | GC,SC,TM,KA, 条件性狭窄 |
| 16 | 鼯鼠 | 3 | GQ, TM, şərti stenotrof |
| 17 | 朱砂 | 3 | GC, TM, 肥大 |
| 18 | 平菇 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 19 | 猪苓 | 5 | GC、SC、TM、肥大 |
| 20 | 长白假单胞菌 | 5 | GC、SC、TM、肥大 |
| 21 | 裂叶菌 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 22 | 高萨帕图姆 | 3 | GC, TM, 条件性狭窄 |
| 23 | 桑葚 | 4 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 24 | 毛栓菌 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
| 25 | 杂色毛茛 | 5 | GC、SC、TM、KA、肥大 |
表 1. 物种归属将菌株的面积和底物关系传播到纯培养中。
注：GC——大高加索地区；KA——库拉阿拉兹低地；TM—塔利什山脉和 SG—小高加索。
1 g生物质中的活度分别为8.34 ui/ml、6.10 ui/ml和5.72倍。T.versicolor R-24 的类似指标为 9.47 ui/ml、6.45 ui/ml 和 8.65 ui/ml。出于这个原因，他们被选为积极的生产者进行进一步的研究。有趣的是，所有这些著名的蘑菇都与生态营养关系密切相关，并且主要以多营养菌为特征。多养菌合成酚氧化酶的更为深入，可能与其适应性强的标志之一有关。
从对选定菌株中影响酶合成的确定因素进行的研究中，首先，阐明碳源的影响，清楚地表明，研究的酚氧化酶具有合成性质。
| 被分离菌株的真菌种类 | 生物质 q/l | 漆酶 | 过氧化物酶 | 木质素酶 | |
| 1 | 蜜环菌 | 6.8 - 9.7 | 62.2 - 71.2 | 45.7 - 51.3 | 50.2 - 56.2 |
| 2 | Bjerkandera adusta | 8.2 - 10.2 | 75.8 - 85.1 | 50.3 - 62.2 | 54.8 - 58.3 |
| 3 | Cerrena 单色 | 8.8 - 10.1 | 87.7 - 98.6 | 55.8 - 66.3 | 59.8 - 68.9 |
| 4 | 槲寄生代达利亚 | 7.7 - 9.2 | 66.0 - 75.1 | 45.3 - 50.8 | 53.7 - 60.4 |
| 5 | 大白菊 | 6.7 - 7.4 | 65.4 - 78.6 | 46.8 - 54.3 | 49.2 - 57.3 |
| 6 | 金针菇 | 8.1 - 9.1 | 58.1 - 68.3 | 37.0 - 48.3 | 45.7 - 59.6 |
| 7 | 大肠炎 | 8.7 - 10.4 | 64.2 - 84.9 | 45.5 - 59.3 | 63.8 - 84.8 |
| 8 | 灵芝 | 6.9 - 9.3 | 62.2 - 70.6 | 47.1 - 53.3 | 52.1 - 60.6 |
| 9 | 灵芝 | 7.5 - 8.6 | 56.2 - 65.1 | 32.0 - 45.9 | 40.9 - 56.7 |
| 10 | 异孔菌 | 7.7 - 9.2 | 57.1 - 64.5 | 32.4 - 43.3 | 40.8 - 55.1 |
| 11 | 香菇 | 7.9 - 9.1 | 53.2 - 65.3 | 32.1 - 48.9 | 41.1 - 55.7 |
| 12 | 虎斑乳杆菌 | 6.9 - 8.8 | 57.8 - 64.5 | 42.5 - 50.3 | 52.5 - 56.5 |
| 13 | Lenzitez 桦木 | 5.5 - 7.7 | 54.3 - 64.3 | 31.5 - 47.2 | 39.9 - 58.3 |
| 14 | 桑黄 | 6.1 - 7.8 | 54.0 - 66.4 | 34.6 - 47.5 | 40.3 - 55.4 |
| 15 | 鲭鱼 | 7.1 - 8.1 | 51.9 - 60.5 | 30.9 - 47.2 | 39.8 - 58.7 |
| 16 | 鼯鼠 | 7.0 - 9.1 | 53.2 - 64.2 | 32.1 - 46.2 | 40,9 - 55.9 |
| 17 | 朱砂 | 5.1 - 6.1 | 51.2 - 62.3 | 30.5 - 45.4 | 39.3 - 57.4 |
| 18 | 平菇 | 7.8 - 9.5 | 84.5 - 94.1 | 50.3 - 64.2 | 47.5 - 67.1 |
| 19 | 猪苓 | 6.8 - 8.9 | 72.7 - 80.6 | 41.8 - 50.3 | 50.3 - 58.1 |
| 20 | 长白假单胞菌 | 8.6 - 9.8 | 63.2 - 85.4 | 46.5 - 58.3 | 60.7 - 73.5 |
| 21 | 裂叶菌 | 7.4 - 8.8 | 78.4 - 92.8 | 50.8 - 60.3 | 60.2 - 79.5 |
| 22 | 高萨帕图姆 | 7.6 - 8.9 | 60.2 - 67.5 | 38.9 - 44.7 | 43.5 - 49.5 |
| 23 | 桑葚 | 7.2 - 9.0 | 58.2 - 69.8 | 35.8 - 47.7 | 44.3 - 47.9 |
| 24 | 毛栓菌 | 8.3 - 10.2 | 74.2 - 90.2 | 50.2 - 62.3 | 67.3 - 78.3 |
| 25 | 杂色毛茛 | 8.7 - 10.1 | 77.1 - 95.6 | 58.9 - 65.1 | 63.1 - 88.2 |
表 2。通过氧化酶活性 (iu/ml) 评估研究中使用的菌株。
注：iu——国际单位。
诱导酶的特点。因此，包含在组合物中木质素的中间化合物形成了连接，但以相对较小的聚合度为特征，这会导致所有三种酶的活性提高这个或那个程度，这在蘑菇 Sch.commune S-21 的示例（表 3）。与对照相比，在所有情况下，将含有木质素的几种底物（木屑、清洁木质素、玉米马等）作为唯一的碳源添加到培养基中，会导致所有三种酶的整体活性（总脱细胞和细胞内活性），这是诱导酶所固有的 [ 18]。然而，这个过程与经典诱导酶的合成略有不同。因此，通过向营养培养基中添加任何碳源，满足
| 碳源 | 漆酶 | 过氧化物酶 | 木质素酶 | |||
| 1 _ | 乙二_ | ○ | 乙 | ○ | 乙 | |
| Cerena 单色 M-16 | ||||||
| 羟基磷灰石 | 22.1 | 14.5 | 10.8 | 7.5 | 19.5 | 14.4 |
| 木屑 | 32.3 | 19.5 | 15.0 | 10.7 | 23.5 | 17.4 |
| 木质素（从黑麦植物中分离） | 43.0 | 28.5 | 24.6 | 14.4 | 32.4 | 22.5 |
| 木质素（从普通松木中分离出来） | 30.0 | 20.5 | 15.4 | 8.4 | 23.2 | 14.7 |
| 玉米马 | 49.4 | 36.4 | 32.9 | 18.7 | 35.1 | 25.1 |
| 麦麸 | 54.3 | 43.7 | 32.3 | 19.5 | 40.1 | 27.8 |
| 曼尼特 | 44.8 | 30.4 | 27.8 | 16.5 | 19.7 | 12.3 |
| 玉米提取物 | 47.5 | 32.1 | 22.4 | 13.7 | 34.7 | 24.1 |
| 蔗糖 | 18.2 | 10.1 | 8.9 | 5.4 | 7.0 | 5.0 |
| 葡萄糖（对照） | 17.2 | 9.6 | 8.2 | 5.1 | 6.0 | 4.2 |
表 3。碳酸对活性生产者中酚氧化酶合成的影响。
注：A——细胞内活性；B——细胞外活性。
与酶的活性。如果总是观察到这些活动被认为是诱导酶固有的基础水平，那么木营养菌微菌中的基础水平就不像在经典诱导酶中那样通过强制确定的量。也就是说，在木营养菌微菌中，诱导合成有其自身的色调，在我们看来，这是由于它们对生活在木质基质中的适应性。更准确地说，木营养大菌类已经获得了一种酶的特征存在，该酶最初引发酶系统中木质纤维素复合物的降解并分泌到细胞外。由于已在其他蘑菇中观察到这种情况，因此可以将其视为木质营养大型菌的特有特征。
4。结论
因此，从进行的研究中可以清楚地看出，在阿塞拜疆不同生态地区传播的木质营养大型菌的白色腐烂导致物种可以积极合成参与木质素降解的酚氧化酶，该酶在 Cerena unicolar，Pleurotus 菌株中发现其最高点ostreatus、Schizophyllium commune 和 Trametes versicolor。虽然酚氧化酶的合成以诱导方式发生，但与经典的诱导酶相比，担子菌的基础水平显着更高，这可以表征为适应生活在木质营养大型菌的木质基质中的标志。
利益冲突
作者声明与本文的发表没有利益冲突。
参考
[ 1 ] 达斯，A.，等人。(2013) 新分离烟曲霉ABK9对纤维素分解酶生长和生物合成调控的研究。波兰微生物学杂志，62，31-43。
[ 2 ] Sharma, A.、Aggarwal, NK 和 Yadav, A. (2017) 从各种生态位中分离和筛选木质分解真菌。微生物学研究万能杂志，5, 25-34。
[ 3 ] Fedorova，TV，Shakhova，NV，Klein，OI，Glazunova，OA，Maloshenok，LG 等。(2013) 不同分类和生态组担子菌木质素分解潜力的比较分析。应用生物化学和微生物学，49，570-580。
[ 4 ] Hasanova, AR (2016) 作为氧化还原酶和多糖生产者的真菌多孔菌科潜力的生态生理学和生物技术方面。博士 论文，巴库，阿塞拜疆，23。
[ 5 ] Stalpers, JA (1978) 鉴定纯培养中的木栖叶目。微生物学研究，16, 248。
[ 6 ] Janusz, G., Kucharzyk, KH, Pawlik, A., Staszczak, M. 和 Paszczynski, AJ (2013) 真菌漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶：基因表达和调控。酶和微生物技术，52，1-12。
[ 7 ] Kadimaliev, DA (2011) 香菇 (Panus) Tigrinus 的漆酶和过氧化物酶参与液体培养基中高浓度苯酚的生物降解。应用生物化学和微生物学，47, 73-78。
[ 8 ] Ilyin, DY 和 Ilyina, GV (2014) 自然和纯培养中的木营养担子菌生态学。RIO PGSA，奔萨，201。
[ 9 ] Kües, U. (2015) 用于环境管理的真菌酶。生物技术当前观点，33, 268-278。
[ 10 ] Ruchai, NS 和 Grebenchikova, IA (2014) 微生物合成技术。白俄罗斯国立技术大学，明斯克，白俄罗斯，167。
[ 11 ] Khacheva, SI (2015) 阿布哈兹共和国受特别保护的自然领土森林生态系统中木材霉菌分解的路径。喀山大学科学笔记，157, 75-89。
[ 12 ] Aliyev, FT (2017) 使用 Trametes Quel 属真菌作为多糖生产者的科学实践方面。博士 论文，巴库，阿塞拜疆，23。
[ 13 ] Gahramanova, FK, Hasanova, VY, Ragimova, MM, Muradov, PZ 和 Hasanova, AR (2014) 一些酚氧化酶在含纤维素底物木质素组分分解中的作用。科学论文科学的基本和应用问题，M：RAS，124-130。