摘要：本工作的目的是研究从以鹅耳枥和山毛榉为生的蘑菇的子实体进行纯培养的担子木营养蘑菇灵芝和平菇的各种化合物的生物合成。如图所示，蘑菇可以合成各种物质，其中包括功能不同的部分。在已发现的馏分中，一种是聚乙炔（PA），其特点是不饱和度高，含有许多双键和三键，在紫外线范围内吸收良好。
关键词
真菌,生物 合成,亚 组分,聚 乙烯,多糖,结构,色谱 条件
一、简介
生物活性物质发展的战略方向之一是靶向合成天然化合物[ 1 ][ 2 ]或其合成类似物，而这些天然聚乙炔化合物是主要的[ 3 ]。
通过化学和微生物学方法 [ 1 ] 开发合成天然聚乙炔化合物的新方法为它们在实际有价值物质的靶向合成中的应用开辟了广阔前景。
现在，这个方向的研究继续吸引大量研究人员、化学家-有机学家、生物有机学家和化学家，以及不同的生物学家 [ 2 ] [ 4 ] 的关注。从科学和应用的方法来看，这个方向是视角一。因此，基于现有原料开发有效的聚乙炔化合物合成方法 [ 5 ] 是一项实际任务。
据了解，担子菌是全系列生物活性化合物的来源，蛋白质、脂类、多糖、有机酸、酶、维生素等，其中大部分是生物活性物质，与化学合成产品相比毒性更小，有效的 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]。其中表达最多的是多糖 (PS) [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] 和聚乙酰基 (PA) [ 5] ，最后一个由许多能够共轭双键和三键的反应组成。使用担子菌作为 PA 化合物的来源，而 PS 是一种非常有前景的方法，因为它为它们的进一步使用提供了机会，以获得可用于医学的生物活性药物 [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ]。
由于担子真菌在阿塞拜疆的广泛分布 [ 16 ]，这项工作的目的是研究担子真菌 Ganoderma lucidum 和 Pleurotus ostreatus 对聚乙炔化合物的生物合成。
2。材料和方法
在工作期间，使用了木糖菌的担子真菌灵芝和平菇。在阿塞拜疆共和国的森林生态系统中，它们与位于鹅耳枥和山毛榉上的真菌子实体区分为纯培养物。
真菌在28℃下在葡萄糖蛋白胨培养基中深度培养。7天内形成的真菌生物质，从培养液中分离出来，粉碎后用水和醋酸乙醚提取。通过不同的方法分析收到的提取物。
合成化合物的红外光谱，由光谱仪 UR_20 在 400-400 sm-1 范围内以薄层拍摄。NMR 1 H 的光谱由“Tesla BS-487 B”（80MHz）装置记录。使用六甲基二硅氧烷作为内标，溶剂-CCl4。色谱研究采用“Kovo”公司（捷克）生产的高效液相色谱仪。使用了排除 (ECF) 和反向凝视吸收流体色谱 (RFAFC) 的双检测器选项。检测器：折光仪和紫外分光光度计（254 nm）。使用尺寸为 3.3 × 150 mm 的色谱柱，填充有孔隙率为 100 A 的吸收剂“Separon SGX”(EFC) 和颗粒尺寸为 7 m·km 的反向熔结 (RFAFC) 的“Separon SGX C-18”。洗脱液-二甲基甲酰胺和乙腈 +H 2O (75 + 25 vol %) 始终如一，给药速度为 0.3 ml/min。Т = 20°C - 25°C。通过 EFC 方法检测分子质量扩散 (MMS) 的参数 [ 17 ]。
3. 结果与讨论
EFC和RFAFC对相应担子真菌（灵芝和平菇）生物质加工后得到的水和醚提取物的研究结果见表1和图1和图2。
发现在有符号类型的真菌的情况下收到的结果之间存在很大的相似性。在这两种情况下，根据 RFAFC 色谱图的特征，可以认为分析的产品由两种不同类型化合物的馏分混合物组成。由于第一个分数是通过折射计同时固定的（曲线 а 和 а I, 选择 1) 并通过具有 5 个最大值和不同强度的多重特征的 UV 检测器 (曲线 b 选择 1 - 5)。这证明了存在 5 种不同功能的亚组分，在 UV 范围内被很好地吸收。折光仪发出的馏分信号的个体特征与物理化学参数的亲和力有关，特别是其结构中化合物的光密度。作为物理化学分析的结果，确定了它们对具有大量三键和双键的高不饱和度聚乙炔化合物的适用性，即吸收在超滤区的活性发色团。其余 4 部分仅通过折光法固定，属于水溶性良好的多糖 (PS)，具有主要官能团（发色羟基），在 UV 范围内不吸收（曲线 a）。
由色谱图特征可知，乙醚提取物中PA（曲线a）的含量明显高于预期，而水提取物中PS（曲线a）占优势。在这两种情况下，从通讯员的生物质中获得的 PA 和 PS 的数量
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分数 № |
馏分名称 | 馏分含量，% | 馏分含量，% | М w /М n |
虚拟现实 |
ММ 虚拟现实 |
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| М W | М n | ||||||||
| 在甲醚中 | 在水里 | ||||||||
| 1 | 功放 | 74 | 6.0 | 180 | 180 | 1.0 | 1 | 180 | |
| 2 | 月草座 | 11 | 42.5 | 1085 | 1085 | 1.0 | 2 | 1085 | |
| 3 | 格普陶萨 | 18 | 31 | 1260 | 1260 | 1.0 | 3 | 1260 | |
| 4 | 寡糖 | 3.0 | 11.5 | 4390 | 3600 | 1.22 | 4 | 2430 | |
| 5 | 寡糖 | 4.0 | 10 | 5450 | 4500 | 1.21 | 5 | 4730 | |
| 6 | --- | - | - | 1912年 | 1260 | 1.82 | 6 | - | |
| 7 | --- | - | - | 829 | 229 | 3.62 | 7 | - | |
| 8 | 功放 | 71 | 8.0 | 180 | 180 | 1.0 | 8 | 180 | |
| 9 | 月草座 | 12 | 40 | 1085 | 1085 | 1.0 | 9 | 1085 | |
| 10 | 格普陶萨 | 7.0 | 33 | 1260 | 1260 | 1.0 | 10 | 1260 | |
| 11 | 寡糖 | 5.0 | 12 | 4600 | 3500 | 1.31 | 11 | 2985 | |
| 12 | 寡糖 | 5.0 | 7.0 | 5600 | 4650 | 1.2 | 12 | 4000 | |
| 13 | --- | - | - | 1806 | 893 | 2.02 | 13 | - | |
| 14 | --- | - | - | 855 | 244 | 3.5 | 14 | - | |
表 1。由于担子菌灵芝（部分 1-7）和平菇（部分 7-14）的生物合成而获得的 PA 的质量分子特征 V R = C 1 -C 2 lgM，С 1 = 24.4，С 2 = 4.0。
图 1。担子真菌类型灵芝在生物合成过程中接收到的 PA 和 PS 混合物的 RFAFC 曲线，通过用甲基醚提取分配（曲线 a 和 b）检测器折射（实线），紫外分光光度法（254 nm）（虚线）。
图 2。在用甲醚（曲线 a 和 b）和水（曲线 a1 和 b1）萃取期间，通过 EFC 模式获得的 PA 和 PS 的 MMR 混合物曲线。检测器：折光仪（实线）、紫外分光光度计（254 nm）（虚线）。
担子菌达到 70% - 80%。
通过 EFC 方法对提取物 MMS 的研究允许确定其组成中每个部分的比例。确定了提供 PA 和 PC 从培养液到 ME 和水的最大转变的最佳条件。例如，ME提取物中PA的含量达到70%（灵芝），而低聚糖的量，在这种情况下，仅达到10%。在水提取物的情况下，确定了相反的情况，即只有 6% 的 PA 部分是固定的，但 80% 的 PS 部分具有不同的 M n值（表 1）。其中聚乙炔通过折光仪鉴定，如 RFAFC 的情况，因此在这种分离模式中的特点是窄拾取，最大 V R = 15.5 适合 M n = 180（图 2, 曲线 a)。EFC 分析也证实了下一个馏分的聚合物结构。因此在研究提取物的 EFC 色谱图上选取 2 - 5（图 2曲线 a），最大值在 V R = 9.8 和 10.2，适用于 M n = 4500 和 3600（10% è 11.5%）的多糖，但在 V R = 12 和 13 与 M n的寡糖级分= 1260（七氮杂）（31%）和 1080（四氮杂）（41.5%）。根据表中给出的数据，在该宽对苯二甲腙中指示级分 MM 的变化，反映在多分散度 (DP) 中。提取物 DPME 的总值（3.62 和 3.5）（表，馏分 7 和 14）比水提物（1.82. 和 2.02.）（馏分 6 和 13）要高。所研究的色谱系统允许从提取物中区分馏分，其 DP 值非常低，介于 1.0 - 1.2 之间。根据表中的信息，在使用担子菌属灵芝和平菇的两种情况下，观察到相同的模式，仅记录了测试提取物组成中组分的定量比例略有不同。这表明，在预期的给定条件下，所测试的生物质栽培担子菌的作用机制是相似的。比较 EFC 和 RFAFC 模式下的 UV 色谱图表明，在最后一种情况下，PA 化合物功能对系统的选择性很高。因此，在 RFAFC 的情况下，PA 分数的多重信号是固定的（图 1，曲线 b 和 b1) 在 EFC 模式下因单峰而异（图 2，曲线 b 和 b1 ）。
为了研究化学成分，通过制备方法分离检测到的PA组分。它是在提取高浓度的条件下，通过对RFAFC的相应选择进行分馏收集，用紫外检测器固定，然后通过结构方式进行分析的。由于对由担子真菌生长的 PA 混合物的化学成分和结构的研究，鉴定了 5 种已知化合物，其下一个结构对应于挑选 1-5（图 1，曲线 b）。指示的化合物按以下顺序依次固定：
1) cis-undeca-3,9,10-trien-5,7-diin 酸-H 2 C = C = CH-CΞC-CΞC-CH = CH-CH 2 -COOH；
2) cis-undec-2-ene-4,6,10-triin酸-HCΞC-CН 2 -CH 2 -CΞC-CΞC-CH = CH 2 -COOH；
3) cis-non-4-ene-6,8-diin acid-HCΞC-CΞC-CH = CH-CH 2 -CH 2 -COOH；
4) cis-undec-3-ene-5,7,10-triin-1-ol-HCΞC-CH 2 -CΞC-CΞC-CH = CH-CH 2 -CH 2 OH；
5) deca-cis-2-trans-8-dien-4,6-diin-1-ol-CH 3 -CH = CH-CΞC-CΞC-CH = CH-CH 2 OH。
因此，生物合成过程的研究结果确定了受试真菌合成 PA 和 PS 的机会，可用于医疗目的。除此之外，开发的色谱条件允许控制培养条件，始终如一地控制生物合成产物的组成和结构。
利益冲突
作者声明与本文的发表没有利益冲突。
参考
[ 1 ] Debbab, A., Aly, AH, Lin, WH 和 Proksch, P. (2010) 海洋细菌和真菌的生物活性化合物。微生物生物技术，3, 544-563。
[ 2 ] Gal, Y.-S., Jin, S.-H., Lyoo, WS, Park, J.-W. 和 Lim, KT (2011) 具有苯偶氮苯部分的聚乙炔衍生物的合成和表征。纳米科学与纳米技术杂志，11，7386-7389。
[ 3 ] Dembitsky, YM (2006) 天然和合成乙酰脂质的抗癌活性。脂质，41，883-924。
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[ 6 ] Chen, Y., Du, X., Zhang, Y., Liu, X. 和 Wang, X. (2017) 松茸多糖的超声提取优化、结构特征和抗氧化活性。浙江大学学报-理科B, 18, 674-684.
[ 7 ] Lin, CH, Chang, CY 和 Lee, KR (2016) 灰树花冷水提取物及其纯化的活性组分在体外和体内抑制肝细胞癌。实验生物学和医学，241、1374-1385。