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摘要：许多真菌限制了布基纳法索的洋葱生产。本研究旨在确定与大田洋葱植物相关的主要镰刀菌属物种，以确定与种子立枯病和球茎腐烂有关的那些，并制定适当的这些疾病的管理策略。为此，从 17 个地点的洋葱植物中分离出 36 株镰刀菌，并对其进行分子分析和生物特征鉴定。结果表明，i分离株属于五种镰刀菌属：尖孢镰刀菌（44.44% ）、增殖镰刀菌（ 41.66 %）、茄病镰刀菌（5.55%）、藤黑镰刀菌（Fusarium fujikuroi ）(5.55%) 和尖刺镰刀菌(2.77%)。尖孢镰刀菌_ 增殖物_ _ 索拉尼和F. _ fujikuroi菌丝发育较快，生长速度为 7.72 - 8.27 mm/d，比F . thapsinum (6.52 毫米/天)。F的分生孢子。尖孢霉_ 增殖和F . solani比F长（4.74 - 5.96 μm） 。藤黑井 和F。 _ thapsinum (3.20 - 4.04 μm)。Fusarium solani和F. oxysporum分别具有最大和最分区的分生孢子。

 

关键词

 

洋葱,镰刀菌,分子 鉴定,生物 特征,真菌 腐烂

 

 

一、简介

 

洋葱在世界各地都有生产。它在西非国家的产量不到世界产量的 1%。布基纳法索是继尼日利亚、尼日尔和塞内加尔 [ 1 ]之后的第 4 西非洋葱生产国，每个国家的洋葱产量均略高于该地区的 3%。在布基纳法索种植的淡季作物中，鳞茎洋葱仅次于番茄，分别占蔬菜作物总产量和面积的 32.4% 和 41.4% [ 2 ]。在布基纳法索，洋葱产量存在差异。2009/2010产季以来，四个主要产区占全国产量的70%左右。这些是，按重要性顺序，Mouhoun 地区的 Boucle 地区、北部地区、中北部地区，最后是中西部地区 [3 ]。总的来说，洋葱种植为众多参与者提供了重要收入，有助于创造就业机会并为生产者提供更好的生活环境。洋葱因其风味和营养价值而备受推崇。它含有丰富的维生素和微量元素，鳞茎和叶片中的主要营养成分种类繁多，有时含量较高。一百克（100克）洋葱含有7毫克维生素C；0.14 毫克维生素 B6；170 毫克钾，相当于每日营养摄入量的 9%、5% 和 5% [ 4 ]。

 

尽管洋葱在营养和经济方面具有重要意义，但它的种植面临着一些限制其生产的生物和/或非生物限制。真菌病害是造成作物 30% 到 40% 的估计产量损失的原因 [ 5 ]，并且是生产的主要生物限制因素。基部鳞茎腐烂等疾病主要是由镰刀菌属真菌引起的，镰刀菌也被认为是造成幼苗猝倒的原因 [ 6 ]。Fusarium oxysporum 是最著名的致病菌种，可导致多种作物的萎蔫、根腐病和冠腐病，并经常导致严重的生产损失 [ 7 ]。几位作者报告说，尖孢镰刀菌是洋葱基部腐烂的病原体 [ 6 ] [ 8 ]]。兹拉塔等人。[ 9 ] 和 Ghanbarzadeh 等人。[ 10 ] 强调了 F. solani 在洋葱植物基部腐烂导致其突然死亡中的责任。对布基纳法索洋葱种植中镰刀菌属物种的重要性的研究很少。唯一的作品是 Dabiré [ 11 ] 的作品，其中强调了 F. oxysporium 和 F. solani 在保护中对幼苗的猝倒和地下部分和鳞茎的腐烂的参与。准确了解导致特定疾病的病原体身份是实施适当疾病控制和监测措施的第一步 [ 12]。由于缺乏歧视性的文化或形态特征，镰刀菌物种的鉴定变得困难。然而，分子工具，特别是 DNA 测序，已成为识别病原真菌的关键手段，无论其发育阶段和形态如何。

 

本研究的目的是在分子和生物计量水平上识别和表征布基纳法索大田中与洋葱植物相关的镰刀菌属的主要物种，以确定与作物主要病害有关的那些，并开发出合适的和这些病原体的可持续管理方法。

 

二、材料与方法

 

2.1。布基纳法索洋葱相关镰刀菌的收集、分离和纯化

 

2017 年 1 月至 2 月，在布基纳法索的 17 个洋葱生产基地采集了洋葱植物样品。采集点位于四个洋葱生产区（图 1 ）)：北部地区，包括 Yako、Ouahigouya、Titao、Korsimoro 和 Kongoussi 遗址；包括莫格泰多、朗比拉和东辛遗址的中部地区；西部地区包括 Kokologho、Koudougou、Réo、Gassan、Di、Tougan 和西南地区，包括 Dano、Soumasso 和 Bama 地区。在每个地点，样本是从相隔至少 5 公里的三个田地中采集的，每个田地随机采集 10 株植物。镰刀菌分离物的分离包括用 3% 的次氯酸钠对每株植物进行消毒并将其切成小块。片段在培养皿中在湿润的吸墨纸上孵育五天。根据真菌鉴定手册[ 13]，在立体显微镜和/或显微镜下检查植物碎片以检测发育中的镰刀菌，无论物种如何。对于每个位点，计算在培养的洋葱植物上检测到的镰刀菌数量，并将结果表示为受真菌攻击的植物的百分比。对于每种类型

 

 

 

图 1。2017年洋葱洋葱产区及植物样品采集点。

 

每株植物鉴定出镰刀菌，一小部分菌丝体在含有 PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）培养基的培养皿中无菌生长。将分离物连续移植到 PDA 培养基中已经产生了这些真菌的纯培养物。

 

2.2. 布基纳法索洋葱相关镰刀菌的分子鉴定

 

单孢培养物是由镰刀菌分离物的纯培养物产生的。对于每个分离物，将两滴含有约 100 孢子/ml 悬浮液的分生孢子悬浮液从 10 天大的纯培养物制备的悬浮液涂在包含在培养皿中的琼脂培养基上。播种两天后，将发芽孢子转移到含有PDA培养基的培养皿中，每皿仅使用一个发芽孢子，并使其生长。每个分离株产生三个单孢分离株。基于菌丝体的颜色和/或分生孢子的形状，每个位点选择一到四个单孢分离株进行分子分析。

 

对于真菌 DNA 提取，首先在马铃薯葡萄糖肉汤 (PDB) 液体培养基上培养单孢菌丝体。为此目的，将取自在PDA培养基上培养的每个单孢分离物的菌丝体外植体无菌沉积在包含在Erlenmeyer中的PDB培养基中。为了刺激液体培养基中菌丝体的发育，将瓶子在实验室室温下以每分钟 120 次振荡的速度在振荡器上孵育两天。从Erlenmeyer中取出菌丝体外植体后，使用真空泵通过过滤收集得到的菌丝体。对于每个单孢分离物，收集 75 mg 菌丝体，转移到 Eppendorf 管中并储存在 -80˚C。使用 Sadfi-Zouaoui 等人使用的方法提取真菌 DNA。[ 14] 有一些修改。六百微升 (600 µl) 十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB) 提取缓冲液 (1.4 M NaCl；2% CTAB (w/v)；0.1 M Tris-Base pH8；0.02 M EDTA pH8；0.2 B-巯基乙醇 (v/v) )) 加入到 75 mg 菌丝体中，并将​​混合物在涡旋上搅拌 10 分钟。然后将试管置于 65˚C 的水浴中 10 分钟，然后加入 450 µl 苯酚和 450 µl 氯仿醇异戊醇（由 49 ml 氯仿和 1 ml 醇异戊醇组成）添加到每个试管中，然后通过倒置试管进行混合，直到获得乳状混合物。在 25°C 下以 13,000 g 离心 5 分钟后，将上清液（约 500 μl）加入到 400 μl 乙醇-异戊基氯仿中，再次在 25°C 下以 13,000 g 离心 2 分钟，然后转移到新试管中通过添加 0。7 体积 (300 µl) 冷异丙醇加入溶液中以沉淀 DNA。将混合物进一步离心后，用 500 μl 75% 酒精冲洗获得的颗粒，并在 25°C 下以 13,000 g 离心 5 分钟，两次，然后在通风橱中干燥，然后溶解在 50 μl 无菌蒸馏水，-20℃保存。

 

然后通过分光光度计 (Nanodrop 2000) 测定 DNA，并以纳克/微升 (ng/µl) 为单位评估初始浓度。根据具体情况对不同浓度进行稀释，以便为 PCR 收集的 DNA (3 µl) 体积包含约 100 ng 的 DNA。扩增反应在含有 100 ng DNA (3 µl) 的 25 µl 中进行；2.5 µl BD 缓冲液，10×；0.5 µl dNTP (10 毫米); 2微升氯化镁（25毫米）；0.2 µl Taq 聚合酶；15.8 µl 无菌蒸馏 H 2 O 和 0.5 µl EF1 至 10 µM 和 EF2 至 10 µM 引物。使用的引物是：

 

EF1：ATGGGTAAGGARGARGACAAGAC [ 15 ]；

 

EF2：GGARGTACCAGTSATCATCATGTT [ 16 ]。

 

扩增反应按照以下程序进行：-95°C 变性循环 10 分钟，然后连续 35 个循环（94°C 变性 30 秒，52°C 杂交 30 秒，72°延伸C 45 秒）。电泳在 1% 琼脂糖凝胶上在 120 V 下进行 20 分钟。使用预先掺入琼脂糖凝胶中的溴化乙锭在紫外光下观察扩增产物。收集来自每个分离物的 30 微升 (30 µl) PCR 产物用于测序。

 

测序由 Genewiz [ 17 ] 使用 P363 和 CHOO9 引物进行。为了鉴定镰刀菌属物种，使用 Chromas 软件对序列进行处理、清理和比对。将获得的共有序列与网站上的 NCBI（国家生物技术信息中心）数据库中的序列进行比较 [ 18 ]。

 

2.3. 布基纳法索与洋葱植物相关的镰刀菌属生物特征

 

为了确定从洋葱植物中分离的镰刀菌物种的良好分化的形态和培养特征，评估了与培养中的菌落生长、分生孢子大小和每个分生孢子的细胞（或分裂）数相关的三个生物特征。

 

使用的实验设计是具有四次重复的随机完整区组设计。为了评估菌落的菌丝体生长，在外植体在 PDA 培养基中孵育后的第九（9）天，在每个培养皿中测量菌落的直径。结果，以毫米表示，是两个相互垂直的直径的平均值。

 

菌丝生长率按以下公式计算：

 

五= [ ( D 1 - 4 ) + ( D 2 - 4 ) ] / N× 2

其中 V = 真菌的生长速率，单位为 mm/天；D1和D2是菌落的两个垂直直径，N是移植外植体后的天数，4是外植体直径。

 

为了评估分生孢子尺寸，每个单孢分离物随机选择 25 个分生孢子（一个分生孢子代表一个重复），测量每个分生孢子的长度和宽度。每个分生孢子的细胞数评估与分生孢子大小评估相结合。每个分生孢子中的细胞数量是通过计算该分生孢子内的细分数量来确定的。

 

使用统计分析系统 (SAS) 软件版本 8 对收集的生物特征数据进行方差分析；2001. 测量参数均值的计算和分离是根据邓肯测试（Duncan Range Multiple Test），在1%的阈值下进行的。

 

3. 结果

 

3.1。布基纳法索不同产地洋葱上镰刀菌属真菌的流行情况

 

从 17 个生产基地共采集了 510 个洋葱植物样品。对这些培养的​​植物样品进行目视检查，可以检测和分离与植物相关的几种镰刀菌。方差分析结果表明，镰刀菌属真菌的流行率因采集地点而异（p < 0.0001）（表1）。这种真菌存在于所有洋葱种植地点，它感染了 10% 至 90% 的采样植物，平均发病率为 62.55%。研究的站点分为四个不同的组： 第 1 组，由九 (9) 个站点组成（Yako，

 

 

根据邓肯检验，分配相同字母的同一列的值不是显着的 5% 阈值。

 

Titao、Gassan、Di、Kongoussi、Korsimoro、Mogtédo、Dano 和 Réo），攻击率最高，从 66.67% 到 90% 不等。第二组包括 Loumbila、Ouahigouya、Donsin、Koudougou 和 Kokologho 的地点，有 53.33% 至 63.33% 的受污染植物。第三组包括一个低流行率为 30% 的单一部位（Tougan）。最后，第四组包括 Bama 和 Soumasso 的地点，其中植物上镰刀菌的流行率非常低（10% - 13.33% 的受感染植物）。考虑洋葱产区，结果还表明，该国北部、西部和中部地区镰刀菌的流行率显着高于西南地区（表2 ）（p=0.0004 ）。

 

 

3.2. 布基纳法索与洋葱植物相关的主要镰刀菌属

 

根据菌丝体的颜色、分生孢子的形状和/或大小，选择了 36 个单孢分离株进行分子分析。使用引物 EF1 和 EF2 在琼脂糖凝胶上获得的色谱结果表明，所有分离物的不同产物的分子量约为 700 bp（图 2），表明这些分离物确实是属于镰刀菌属的真菌。

 

对获得的序列进行分析并与 NCBI 数据库中的序列进行比较，发现 26 个分离株的同一性为 99%，5 个分离株为 98%，4 个分离株为 97%，1 个分离株为 93%（表 3）。分析表明，分离株属于镰刀菌属的五种：

 

- 尖孢镰刀菌，包括 16 个分离株（占研究分离株的 44.44%），与 NCBI 的参考种质 JF957830.1、KU985430.1 和 JF957820.1 的相似率为 93% - 99%。

 

- 增殖镰刀菌，包括 15 个分离株 (41.66%)，与 NCBI 参考登记号 KF222556.1 的相似率为 99%。

 

- Fusarium solani，包括两个分离株 (5.55%)，与 NCBI 参考资料 KY486699.1 和 KR816154.1 的相似率为 99%。

 

- Fusarium fujikuroi，其中还包括两个分离株 (5.55%)，与 NCBI 参考登记号 LC055826.1 的相似率为 97%。

 

- Fusarium thapsinum 包含单一分离物 (2.77%)，与 NCBI 参考登记号 KU508368.1 的相似率为 99%。

 

 

F. o =尖孢镰刀菌；F. pro = 增殖镰刀菌；F. fujik = Fusarium fujikuroi; F. s = 茄病镰孢；F. thap = Fusarium thapsinum。Yk = 矢子；T = 提涛；Ga =月山；迪; 公斤=孔古西；K r = 科西莫罗；镁 = 莫格泰多；达 = 达诺；R = 雷奥; Lm = 朗比拉；Oua = Ouayigouya; 做=唐辛；Kd = 口都沟；Kk = Kokologho; Tg = Tougan；Sm = 苏马索；巴=巴马。

 

 

 

图 2。某些单孔镰刀菌分离株 EF1 和 EF2 延伸因子扩增的 PCR 产物迁移 (KINTEGA, 2018) 1, 2, 3, 4… DNA 用于 PCR 的分离株数量。

 

3.3. 布基纳法索洋葱植物主要镰刀菌的生物特征

 

对包括真菌的菌丝体生长速度、分生孢子的长度和直径、每个分生孢子的细胞数在内的生物特征数据进行方差分析，揭示了镰刀菌属物种之间的显着差异。一般来说，尖孢镰刀菌、增殖菌、茄病菌和藤壶菌在 PDA 培养基上的菌丝体发育较快（7.72 - 8.27 mm/d），相比之下，F. thapsinum 的菌丝体生长缓慢（6.52 mm/d） (表 4）。F. oxysporum、F. proliferatum 和 F. solani 的分生孢子比 F. fujikuroi (3.20 µm) 和 F. thapsinum (4.04 µm) 的分生孢子相对较长 (4.74 - 5.96 µm)。在五个物种中，F. solani 的分生孢子最大（1.88 µm 宽），而 F. oxysporum 的分生孢子每个分生孢子的细胞数最多（1.94）。结果还显示同一物种内的分离株之间的变异性。事实上，12 个属于尖孢镰刀菌种的分离株（即 75% 的种群）生长较快（7.88 - 9 mm/d），而 4 个分离株（即 25%）生长缓慢（6.72 - 7.33 mm/d）（表5）。在快速生长的分离株中，Fo-8-Lm 和 Fo-60-Kd 分生孢子长（12.28 - 17.24 µm）和大（1.92 - 3.96 µm），每个分生孢子有超过三个细胞（每个分生孢子有 3.40 - 5.80 个细胞） . 该物种的所有其他分离株均显示小分生孢子（2.52 - 10 µm × 1 - 2 µm），每个分生孢子有 1 至 2.48 个细胞（表 5）。

 

镰刀菌 物种	菌丝生长速度（mm/d）	数量 细胞/分生孢子	分生孢子宽度 (µm)	分生孢子 长度（微米）
F.增殖	8.31a	1.49b	1.11b	5.29ab
尖孢镰刀菌	8.27a	1.94a	1.32b	5.96a
F. solani	7.72a	1.42b	1.88a	4.74abc
F. fujikuroï	7.90a	1.04b	1.02b	3.20c
F. thapsinum	6.52b	1.24b	1.12b	公元前4.04
平均	8.19	1.65	1.25	5.41
标准差	0.13	0.05	0.02	0.02
p值	0.0005	<0.0001	0.0011	0.0005

表 4。田间与洋葱相关的五种镰刀菌的生物形态特征。

F. oxysporum 分离株	菌丝生长速度（mm/d）	数量 细胞/分生孢子	分生孢子宽度 (µm)	分生孢子长度 (µm)
Fo-8-Lm	9.00a	5.80a	3.96a	17.24a
Fo-63-Kr	9.00a	1.00克	1.00b	3.24ef
Fo-5-Sm	9.00a	2.08de	1.00b	6.43天
Fo-66-Sm	9.00a	1.68ef	1.00b	5.32de
Fo-61-Kd	9.00a	2.44c	2.00b	10.00c
佛16-巴	8.95ab	1.00克	1.00b	2.52f
Fo-60-Kd	公元前8.80	3.28b	1.92b	12.28b
Fo-49-Da	8.66c	1.12克	1.00b	3.00ef
Fo-59-Yk	8.37天	1.32fg	1.28b	3.84ef
Fo-42-Di	8.12e	1.00克	1.00b	3.24ef
Fo-67-Mt	8.00ef	1.72ef	1.00b	5.12de
Fo-58-Yk	7.88f	1.00克	1.00b	3.12ef
Fo-52-Kg	7.33克	2.24cd	1.00b	3.88ef
Fo-7-Lm	7.33克	2.48cd	1.00b	9.64c
Fo-50-Kg	7.16小时	1.36fg	1.08b	3.44ef
Fo-9-Lm	6.72i	1.00克	1.00b	3.24ef
平均	8.27	1.94	1.32	5.96
标准差	0.98	0.74	0.16	0.56
P值	<0.0001	<0.0001	<0.0001	<0.0001

表 5。布基纳法索大田中与洋葱相关的 16 株尖孢镰刀菌的菌丝体生长速度、分生孢子大小和每个分生孢子的细胞数。

 

在 F. proliferatum 物种中，12 个分离物（即 80%）快速生长（7.86 - 9 mm/d），而 3 个分离物（即 20%）生长缓慢（表 6）。在快速生长的分离物中，F.pro-4-Sm；F.pro-15-R；F.pro-3-Sm 产生长分生孢子 (9.44 - 11.24 µm)，每个分生孢子有 2.60 到 2.96 个细胞（表 6）。相比之下，其他分离株具有小的分生孢子。

 

F. fujikuroi 包括两种分离株，一种快速生长 (8.98 mm/d)，另一种生长缓慢 (6.81 mm/d)。对于其他特征，这两个分离株之间没有发现显着差异（表 7）。在 F. solani 中，分离株 F. s-38-Tg 的特点是生长速度快（9 mm/d）和大的分生孢子（2 µm 宽），而分离株 F. s-24-Kk 的特点是生长缓慢6.45 mm/d 和细分生孢子（1.76 µm 宽）。

 

F. proliferatum 分离株	菌丝生长速度（mm/d）	数量 细胞/分生孢子	分生孢子宽度 (µm)	分生孢子长度 (µm)
F.pro-32-Tm	9.00a	1.52bc	1.00c	4.92cd
F.pro-3-Sm	9.00a	2.68a	1.00c	9.44ab
F.pro-15-R	9.00a	2.60a	1.96a	10.88a
F.pro-31-Ba	8.98a	公元前1.36	1.08b	3.56cde
F.pro-33-Tm	8.97a	1.56b	1.00c	5.28c
F.pro-37-欧	8.81ab	1.00c	公元前1.04	3.96cde
F.pro-19-Kr	8.79ab	1.08c	2.00a	8.00b
F.pro-4-Sm	公元前8.44	2.96a	1.00c	11.24a
F.pro-11-R	公元前8.40	1.00c	1.00c	3.88cde
F.pro-18-Kr	8.29bcd	1.00c	1.00c	2.88de
F.pro-29-Mt	7.9583cd	1.04c	1.00c	4.44cde
F.pro-21-Do	7.8611d	1.00c	1.00c	3.52cde
F.pro-17-Kr	7.2917e	1.00c	1.00c	2.52e
F.pro-14-Ga	7.19ef	1.00c	1.00c	2.68de
F.pro-1-Ga	6.77f	1.00c	1.00c	2.24e
平均	8.31	0.16	1.13	5.29
标准差	0.85	0.42	0.91	0.42
P值	<0.0001	<0.0001	<0.0001	<0.0001

表 6。布基纳法索大田中15株与洋葱相关的增殖镰刀菌的菌丝体生长速度、分生孢子大小和每个分生孢子的细胞数。

镰刀菌分离株	菌丝生长速度（mm/d）	数量 细胞/分生孢子	分生孢子宽度 (µm)	的长度 分生孢子 (µm)
茄病镰刀菌
Fs-38-Tg	9.00a	1.36a	2.00a	4.76a
Fs-24-Kk	6.45b	1.44a	1.76b	4.72a
平均	7.72	1.4	1.88	4.74
标准差	0.98	0.006	0.136	0.0002
磷	<0.0001	0.7799	0.0083	0.9056
藤黑镰刀菌
F.fujik-2-Ga	6.81b	1.08a	1.00a	3.36a
F. fujik-27-Mt	8.98a	1.00a	1.04a	3.04a
平均	7.90	1.04	3.20	1.02
标准差	0.99	0.04	0.02	0.02
磷	<0.0001	0.1551	0.2946	0.3223

表 7。在布基纳法索，两个茄病镰刀菌分离株和两个与洋葱相关的藤黑镰刀菌分离株的菌丝体生长速度、分生孢子尺寸和每个分生孢子的细胞数。

 

根据邓肯检验，分配相同字母的同一列的值不是显着的 5% 阈值。

 

4。讨论

 

对布基纳法索 17 个洋葱种植地点取样的洋葱植物的分析结果表明，这些地点存在镰刀菌属真菌，并根据受这些地点污染的植物比例将这些地点分为三类菌类。在所有研究地点都发现了镰刀菌，表明这种真菌存在于布基纳法索的洋葱田中。每个主要洋葱种植区至少有一个地方的流行率很高。然而，该国北部、西部和中部地区的患病率高于西南地区。几乎所有位于北部地区的地点都受到严重污染。这可以用北部地区盛行的有利于镰刀菌发育的条件来解释，其特点是高温（20˚C - 38˚C）和空气相对湿度低。由于镰刀菌可通过种子传播，因此应采取预防措施，避免种子批次不受控制地从高度污染地区（北部、西部、中部）转移到低污染地区（西南地区）。

 

对研究区域收集的镰刀菌分离物进行分子分析后，可以鉴定出五种镰刀菌，并注意到其中两种的强烈分布：在 17 个地点中的 10 个发现尖孢镰刀菌（占分离株的 44.4%），以及镰刀菌。 proliferatum (41.66% 的分离株) 在八个生产地点发现。F. solani 和 F. fujikuroi 物种分别出现在两个地点，而 F. thapsinum 仅在 Ouahigouya 的单一地点观察到。几位作者之前已经从洋葱植物中分离出尖孢镰刀菌，并且还强调了该物种在基础洋葱腐烂中的责任 [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] [ 19]。F. oxysporum、F. solani 和 F. proliferatum 也已从洋葱和大蒜 (Allium sativum L.) 中分离出来，并被鉴定为与幼苗猝倒和/或球茎收获后退化有关的病原真菌 [ 10 ] [ 11 ] [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ]。Dabiré 于 2017 年 [ 11 ] 在布基纳法索诊断洋葱真菌病原体的工作，之前揭示了在 Korsimoro 和 Moctédo 和 Sourou 存在尖孢镰刀菌，这与本研究中获得的结果一致。在前两个地点，除了尖孢镰刀菌外，本研究还发现了 Korsimoro 的 F. proliferatum、Mogtédo 的 F. proliferatum 和 F. fujukuroï。

 

在生物特征表征方面，对菌丝生长速度的评估允许区分 F. oxysporum、F. proliferatum、F. solani 和 F. fujikuroï，它们的菌落在 PDA 培养基上生长迅速（7.72 - 8.27 mm/d），来自 F. thapsinum，另一方面，它经历了缓慢的增长（6.52 毫米/天）。然而，这个字符不允许将前四个物种彼此区分开来。分生孢子的长度和宽度，每个分生孢子的细胞数量也不足以区分这五个物种。因此，正如 O'Donnell 等人的一些作者一样。相信，[ 12] 仅凭视觉分析不足以识别镰刀菌属。在尖孢镰刀菌内，两个分离株 Fo-8-Lm 和 Fo-60-Kd 显示出长而宽的分生孢子 (12.28 - 17.24 µm × 1.92 - 3.96 µm)，每个分生孢子有 3 到 6 个细胞。这两种分离株的分生孢子似乎主要是大分生孢子，这与该物种的其他分离株的分生孢子很小，因此是微分生孢子不同。同样，对于分离株 F.pro-4-Sm；F.pro-15-R；F.pro-3-Sm 种 F. proliferatum 产生长分生孢子 (9.44 - 11.24 µm)，每个分生孢子有 2 至 3 个细胞，其分生孢子似乎由大分生孢子组成。对于其他分离物，产生的大多数小尺寸（<10 µm 长）的分生孢子应主要由微分生孢子形成。这些结果表明在尖孢镰刀菌和尖孢镰刀菌中存在不同的菌株。增殖。本研究证实了 Sumana 等人的观点。[22 ]谁在尖孢镰刀菌中检测到强烈的遗传多样性。sp。印度卡纳塔克邦的烟草（来自烟草）。

 

5. 结论

 

已在布基纳法索的洋葱植物上检测到镰刀菌属真菌，检出率从 10% 到 90% 不等。对从不同洋葱生产地点收集的 36 株镰刀菌进行分子分析，鉴定出 5 种镰刀菌，包括尖孢镰刀菌、增殖镰刀菌、茄枯镰刀菌、藤黑镰刀菌和尖孢镰刀菌。尖孢镰刀菌和增殖镰刀菌分别占分离株的44.44%和41.46%，是各产区最具代表性的菌种。生物形态学研究表明，尖孢镰刀菌、增殖镰刀菌、茄病镰刀菌、藤黑镰刀菌在PDA培养基上的菌丝体生长速度快于毒菌。鉴定出的镰刀菌属物种，特别是尖孢镰刀菌和增殖镰刀菌，在其中重新组合，分生孢子主要由大分生孢子组成的分离物和其他分生孢子主要由小分生孢子组成的分离物。这些结果表明在每种镰刀菌属中都存在不同的菌株。对不同分离株进行致病性鉴定，一方面可以确定与布基纳法索洋葱的两种主要病状苗木猝倒和基部鳞茎腐烂有关的镰刀菌属物种，另一方面，可以确定最常见的致病性镰刀菌菌株。准确了解这些病原体对于为这些疾病开发适当和可持续的管理方法至关重要。一方面，确定与布基纳法索洋葱的两种主要病状苗立枯病和基部鳞茎腐烂有关的镰刀菌属物种，另一方面，确定最具致病性的镰刀菌菌株。准确了解这些病原体对于为这些疾病开发适当和可持续的管理方法至关重要。一方面，确定与布基纳法索洋葱的两种主要病状苗立枯病和基部鳞茎腐烂有关的镰刀菌属物种，另一方面，确定最具致病性的镰刀菌菌株。准确了解这些病原体对于为这些疾病开发适当和可持续的管理方法至关重要。

 

致谢

 

作者要感谢瓦加杜古圣母无原罪修女会 (SICO) 和环境与农业研究所 (INERA) 对这项工作的财政支持。他们还感谢 CREAF 植物病理学实验室的工作人员在收集和处理样本方面所做的努力，以及 LMI Patho-Bios 在分子生物学分析方面的技术援助。

 

利益冲突

 

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

 

参考

 

[ 1 ] Tarpaga, WV (2012) Contribution à l'étude de la montaison prématurée des variétéstropicales d'oignon (Allium cepa L.): Cas du Violet de Galmi, cultivé au Nord du Burkina Faso。Thèse de Doctorat，瓦加杜古大学，布基纳法索，120。

[ 2 ] DPSAA (2011) 市场园艺模块分析报告。中央农业普查办公室，农业、水利和渔业资源部，布基纳法索，237 页。

[ 3 ] Ministère de l'Agriculture et de l'Hydraulique (MAH)/DGPER/DPSAA，Bureau central du recensement général de l'agriculture (2011) 第 2 阶段 RGA 2006-2010。Rapport du module maraichage。瓦加杜古，布基纳法索。

[ 4 ] White, K. 和 Zellner, J. (2008) 洋葱。食品的科学、文化和政治。29.

[ 5 ] Oudet, M. (2011) La filière oignons: Une filière peuorganisée mais pleine d'avenir。在：ABC 布基纳，Vu au Sud-Vu du Sud，Numéro 421。

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