摘要：牛生产是非洲人民及其经济不可或缺的一部分。为了提高牛的生产力，需要将分子标记辅助选择灌输到当前的育种实践中。在这项研究中，我们在White Fulani 和 Muturu 牛品种中调查了两个候选基因（Smoothened- SMO和脂肪酶成熟因子 1- LMF 1 ）的多态性，据报道这些基因会影响牛的体型。SMO基因编码 SMO （平滑）受体蛋白；一种膜信号传感器，在控制骨形成和脂肪生成中发挥作用。LMF 1编码为调节血管脂肪酶翻译后成熟的 LMF1 蛋白。通过直接DNA 测序或聚合酶链式反应——限制性片段长度多态性对基因的所需区域进行扩增和基因分型。对于关联研究，对每只动物测量可用于预测体型的线性身体测量特征 (BMT)，并比较两个品种之间测量的 BMT 值。对于所有比较的 BMT，观察到非常显着 (P < 0.001) 的差异，有利于 White Fulani。在SMO上发现了六 (6) 个先前报告的 SNP（G21234C、C22424T 和 C22481T、T22939C、C23329T 和 T23458G），而LMF 1 在预期的 (T > C) 外显子 4 突变位点是单态的。关联分析显示，G21234C、C22424T、T22939C 和 T23458G 基因座的多态性显着影响两个牛品种的 BMT（P < 0.05 或 0.01）。这项研究的结果表明，SMO基因可能是一个有用的候选基因，有助于标记辅助选择体型，而LMF 1在牛品种中是单态的。
关键词
Smoothened ,脂肪酶 成熟 因子 1 ,身体 测量 性状,白 富拉尼, Muturu ,多态性
一、简介
牛生产是非洲人民及其经济不可或缺的一部分。它贡献了发展中国家农业 GDP 的 33% [ 1 ]。根据 [ 2 ]，该行业在 1970 年至 2005 年期间为尼日利亚的年度国内生产总值 (GDP) 贡献了 3.2% 至 4%。牛是人们宝贵的蛋白质来源，它代表了小农的谋生手段规模的农村牛主和那些参与牛生产价值链的人 [ 3 ]。
多年来，研究人员使用基因组工具来识别影响牛身体特征的基因和强调个体牛之间观察到的差异的遗传变异。SMO基因已被标记为在脊椎动物和无脊椎动物的骨骼组织发育和脂肪生成中具有贡献作用 [ 4 ]。它编码 SMO（平滑）受体蛋白；一种膜信号传感器，通过hedgehog信号通路在控制骨形成和脂肪生成中发挥作用[4, 5]。该基因被定位到牛第 4 号染色体，具有 12 个外显子，编码 780 个氨基酸 [ 6 ]。SMO的假设[ 7 ]首次测试了影响牛经济重要性状的基因多态性。使用 PCR 限制性片段长度多态性 (RFLP)，Zhang等人。[ 7 ] 在562 头秦川牛的SMO基因上检测到三个单核苷酸多态性（SNP） ，关联研究进一步表明，三个多态位点中的两个（G21234C 和 C22424T）与体型和肉质性状显着相关。2015年，[ 6 ]还进行了一项研究，证实了牛SMO基因变异影响牛体型的假设。通过直接测序SMO的编码区和 3'UTR 区在 520 头秦川肉牛基因中，他们鉴定了 8 个单核苷酸多态性 (SNP)，连锁不平衡分析揭示了 5 个单倍型群。总的来说，SMO基因可能是一个有用的候选基因，可用于在育种计划中对体型较大的牛进行标记辅助选择。据我们所知，没有关于该基因在非洲牛中的多态性的信息。
另一个影响体型的候选基因是脂肪酶成熟因子 1 ( LMF 1)。LMF 1 编码 LMF1 蛋白。帕特尼蒂等人。[ 8 ] 是第一个在小鼠中鉴定出这种蛋白质的人，其中影响 LMF1 蛋白的突变导致携带双突变等位基因的小鼠出现高血糖。这是由于这些小鼠的血浆脂肪酶水平非常低。在人类中也发现了这种异常[ 9 ]。LMF 1 位于牛染色体 25 [ 10]。血浆脂质的代谢受血管脂肪酶-脂蛋白、肝脏和内皮脂肪酶的控制。通过它们对甘油三酯的作用，它们调节血浆脂质水平并控制组织摄取；从而保护动物免受心血管疾病的侵害 [ 11 ]。为了使这些脂肪酶获得活跃的酶促功能，它们的胚胎多肽链需要翻译后成熟 [ 12 ]；一个依赖于脂肪酶成熟因子 1 (LMF1) [ 13 ] 的过程。所有这些过程都发生在脂肪酶表达组织（如脂肪肌肉和心脏）内的细胞内质网中 [ 14 ]。在牛中，[ 10] 筛选了 4 个中国牛品种——南阳、秦川、嘉县和中国荷斯坦牛——寻找LMFI的错义突变。使用 PCR-SSCP、直接测序和 PCR-RFLP（AvaI 核酸内切酶），他们在四个牛品种中的三个中报告了LMF 1 外显子 4 中的 SNP（T > C） 。该多态性与南阳牛的生长性状有关。T > C 突变导致LMF1 蛋白中的Trp > Arg 取代。任等人。[ 10 ] 仍然是LMF 1 基因多态性及其与牛生长性状相关性的唯一出版物。
在这项研究中，我们调查了尼日利亚白富拉尼牛和穆图鲁牛品种中SMO和LMF 1 基因的多态性，并进行关联分析以评估SMO遗传变异与身体测量性状的影响。White Fulani 是一种Bos indicus，被认为是尼日利亚数量最多、分布最广的牛品种，占该国牛群的 37% [ 15 ]。Muturu 是一种西非牛磺酸，是一种体型较小的耐锥虫牛 [ 16]。因为牛体重的常规测量可能是劳动密集型的并且不可持续，线性身体测量通常用作体重的预测测量。据报道，心脏周长和臀部高度等特征与体重具有高度的表型和遗传相关性 [ 17 ]。伊格等人。[ 18 ] 报道心脏周长、角长、体长和臀高可用于预测白富拉尼牛的体重，它们各自的决定系数分别为 0.92、0.82、0.83 和 0.69。昏暗等人。[ 19 ] 报告了同一品种的类似结果，强调心脏周长是预测体重最可靠的参数。Daikwo 等人。[ 20] 获得了一个多元回归方程，以通过线性身体测量来预测 Muturu 牛的体重。心围和体长占体重差异的90%；证明可以从这两个参数中高精度地预测体重。
2。材料和方法
2.1。数据收集和动物来源
Muturu 和 White Fulani 各 40 头成年牛（19 - 24 个月大）从不同的牲畜所有者中随机选择，尽可能远亲。这些牛是在半集约化系统下饲养的。Muturu 和 White Fulani 分别来自尼日利亚奥贡州的 Ipokia 地方政府区和奥约州的奥约西部地方政府区。从每只动物获得线性身体测量值（体长、心围、肩高、臀部长度和胸部深度）用于统计分析。如吉尔伯特等人所述，使用测量棒/胶带进行测量。[ 21] 并由一个人完成，以尽量减少错误。使用来自 PERFORMAGENE 的 PG-100 采集试剂盒，从每只动物身上采集鼻拭子用于 DNA 提取。该研究于 2019 年 1 月至 2019 年 9 月期间进行。
2.2. 基因组 DNA 提取
按照 https://www.dnagenotek.com/US/pdf/PD-PR-083.pdf 上的 PERFORMAGENE 指南从鼻拭子中提取基因组 DNA。
2.3. PCR扩增
对于本研究中考虑的两个基因，订购了文献中列出的用于扩增所需基因区域的引物。如文献中报道的，每个基因区域内的扩增区域和预期的 SNP 列于表 1。按照引物设计公司的规定，首先将引物与各自数量的 1xTE 缓冲液混合，使其达到 100 µM。然后将正向和反向引物混合并稀释至 10 µM 的工作浓度。
聚合酶链式反应 (PCR) 在 15 µL 反应混合物中进行，其中包含 2 µL 基因组 DNA、1 µM 引物混合物、7.5 µL PCR ImmoMix（包含氯化镁、DNA 聚合酶和 dNTPs-Bioline Ltd，UK）和 4.5 µL dd H 2 O. PCR 循环在 G-Storm GS1 热循环仪（Akribis Scientific Limited，UK）中进行，一般方案如下：98˚C 10 分钟（初始变性），然后在 98˚ 下进行 35 个变性循环C 30 s，50°C 退火 30 s，最后在 72°C 延伸 60 s。用于扩增每个基因区域的实际退火温度列于表 1。在 1% 琼脂糖凝胶上检查 PCR 产物。
| 基因 | 目标区域 | 单核苷酸多态性 | 引物 | 长度 (bp) | 在 | 参考 |
| SMO | 外显子 9 | G21234C | F: GCTTCACCCGTCTACTACCC | 163 | 50 | [7] |
| R：GCTCATGGAAATGCCAGTTC | ||||||
| 外显子 11 | C22424T | F：CCTTCAAACTGGGGATGGGT | 319 | 60 | [7] | |
| C22481T | R：ATCCATACCTGGCGTTGC | |||||
| 外显子 12 | T22939C | F：CACAGAGCTTAGAGTCCCAG | 601 | 50 | [6] | |
| R：AAGCCTCGGAACGGTATTTGT | ||||||
| 3'UTR | C23329T | F：CTCATGGATGCAGACTCCGAC | 65 | [6] | ||
| T23458G | R：GTGGGTTACTGGCCTACGG | |||||
| LMF1 | 外显子 4 | T27154C | F：CATCCTGCCTGGGCTCTG | 307 | 50 | [10] |
| R：TCACGGGCTCAGAAACAGGT |
表 1。用于扩增每个基因的目标区域的引物。
bp：碱基对，AT：退火温度（摄氏度），参考：参考。
2.4. 通过 PCR 限制性片段长度多态性进行基因分型
使用Sau 96 I (New England, Biolabs) 限制性内切酶，通过限制性片段长度多态性 (RFLP) 对SMO外显子 9 扩增子进行基因分型。消化混合物——包含 5 µL PCR 产物、0.5 µL 限制性内切酶、2 µL Cut smart 缓冲液和 12.5 µL dd H 2 O——在 37˚C 下孵育过夜。消化产物按照上述相同程序在 2% 琼脂糖凝胶上电泳，不同的是琼脂糖的量为 3 克。
2.5. 扩增子清理
首先纯化来自要直接测序的基因区域的 PCR 产物，以便去除引物和缓冲液，留下纯 DNA。在 15 µL PCR 产物中加入60 µL 乙醇/NaOAc 溶液（9375 µL 100% 乙醇、450 µL 3 M 乙酸钠和 2175 µL dd H 2 0）。将混合物放置 15 分钟以使 DNA 沉淀，然后在 2500 RCF 下离心 45 分钟。此时，DNA已沉淀，将PCR板在离心机中倒置5秒以除去含有引物和缓冲液的溶液。为了去除任何剩余的引物，向每个样品中加入 75 µL 80% 乙醇，离心 5 分钟并倒置以去除溶液，留下纯 DNA。纯化的 DNA 用 13 µL dd H 2 O稀释。
2.6. DNA测序
5 µL 纯化 DNA 样品与 2 µL 稀释 (1:50) 正向或反向引物混合。在此之后，它被送到阿伯里斯特威斯大学的生物、环境和农村科学研究所 (IBERS) 测序设施进行 Sanger 测序。
正向入门：SMO UTR
反向底漆：SMO 12、SMO 11、LMF 1
2.7. 序列比对
使用 BLAST 对 NCBI/GenBank 数据库搜索生成的序列读数，以检查与感兴趣基因的百分比同一性。使用 Genomic Workbench 软件 (v. 6.5, CLC Bio Ltd)，构建来自所有样品的序列读数的多重比对，以评估每个位置的碱基构成和随后的 SNP 鉴定。该软件还用于修剪低质量的读数。由多个读数表示的碱基位置被确定为候选多态位点。检查多态位点的碱基调用分数和每个碱基变体（等位基因）在样品中出现的次数，以增加序列变体是真正突变的信心，而不仅仅是序列错误。天才软件（2019.2版）【22] 用于对齐多个色谱图，以根据 SNP 位点处双峰的存在来检查突变位点的纯合性和杂合性。
2.8. 关联研究和统计分析
身体测量特征与动物的年龄（19-24 个月）线性回归，以说明年龄差异对体型的影响。使用来自线性回归方程的回归系数值，将从每只动物获得的数据转换为其预测的 24 个月值。从现场获得的原始数据和 24 个月调整后的数据列于补充表 S6中。采用的线性回归模型是
是一世= a + bX一世+e一世
在哪里;
Y i = 线性身体测量值，a = Y 轴上回归线的截距，b = 回归系数，X = 年龄，e i = 关于回归线的随机误差。
使用 t 检验比较来自 Muturu 和 White Fulani 的数据。通过直接计数计算每个 SNP 的等位基因和基因型频率。使用卡方 (χ 2 ) 分析测试基因型频率偏离 Hardy-Weinberg 平衡的情况。SPSS软件采用单因素多变量ANOVA确定SNP标记与身体测量性状之间的关联；版本 24. 通用线性模型 (GLM) 程序遵循以下模型：
是一世= μ +G一世+ε一世
在哪里;
Y i = 对每个人测量的特征；μ = 总体平均值；G i = 第 i 个基因型的固定效应；ε i = 随机误差。
3. 结果
3.1。回归方程
表2中显示的是每个性状随年龄回归的决定系数 (R 2 ) 值。除了白色富拉尼的臀部长度和胸部深度分别为 73% 和 64% 外，这些值均为正值且高于 80%。
| 性状（厘米） | WF | 穆图鲁 |
| 提单 | 0.86 | 0.88 |
| HG | 0.83 | 0.96 |
| WH | 0.89 | 0.91 |
| 强化学习 | 0.73 | 0.91 |
| 光盘 | 0.64 | 0.94 |
表 2。每个性状对年龄回归的决定系数（R 2值）。
WF = 白色富拉尼，BL = 身长，HG = 心围，WH = 肩高，RL = 臀部长度，CD = 胸部深度。每个性状的观察次数 = 40。
3.2. t 检验比较 Muturu 和 White Fulani 的值
使用 t 检验比较两个品种的值（表 3）。对于所有比较的性状，观察到非常显着 (P < 0.001) 的差异，有利于白富拉尼。
3.3. SMO基因多态性
3.3.1。SMO 外显子 9
在牛SMO基因的外显子 9 中扩增了一个 163 bp 的区域。当与限制性内切酶Sau 96 I孵育以检测秦川牛 21,234 bp 位点处观察到的 G > C 突变时，PCR 产物产生代表 CC、GC 和 GG 的三种条带模式（图 1和图 2） . 与[ 7 ]的结果相称，CC由一个片段（163 bp）表示，GG由两个片段（64和99 bp）表示，GC由三个片段（64、99和163 bp）表示。
计算每个品种的等位基因和基因型频率（表 4）。在White Fulani中，具有杂合GC基因型的个体最多，其次是CC和GG，分别。在 Muturu，杂合 (GC) 基因型，
图 1。凝胶电泳显示了White Fulani 中三种SMO 9 基因型的 RFLP 条带模式。GC、CC 和 GG——观察到的基因型。
图 2。凝胶电泳显示了 Muturu 中三种SMO 9 基因型的 RFLP 条带模式。GC、CC 和 GG——观察到的基因型。
| 性状（厘米） | （平均值±标准误差） | P值 | |
| 白富拉尼 | 穆图鲁 | ||
| 身高（厘米） | 133.55±0.69 | 102.59±0.47 | <0.001 |
| 汞柱（厘米） | 155.85±0.83 | 128.53±0.41 | <0.001 |
| 宽（厘米） | 140.63±0.77 | 83.52±0.37 | <0.001 |
| RL（厘米） | 52.60 ± 0.67 | 37.11 ± 0.27 | <0.001 |
| 光盘（厘米） | 74.17 ± 0.81 | 55.79±0.23 | <0.001 |
表 3。t 检验比较每个性状的平均 White Fulani 和 Muturu 值。
| 品种 | 基因型频率 | 全部的 | 等位基因频率 | HWE (χ 2 ) | P值 | |||
| 抄送 | GC | GG | C | G | ||||
| WF | 0.38 (14) | 0.57 (21) | 0.05 (2) | 37 | 0.66 | 0.34 | 2.19 | 0.334 |
| 穆特 | 0.25 (9) | 0.39 (14) | 0.36 (13) | 36 | 0.44 | 0.56 | 1.824 | 0.402 |
表 4。Muturu 和 White Fulani 牛SMO外显子 9 基因G21234C SNP 的等位基因和基因型频率
WF：White Fulani，MUT：Muturu，频率。频率，HWE：Hardy-Weinberg 平衡。
尽管它仍然具有最高的频率，但与群体中的 GG 基因型相比，它只发生在一只动物身上。基因型 CC 的发生频率最低。所有基因型频率均未偏离 Hardy-Weinberg 平衡。
3.3.2. SMO 外显子 9 G21234C 多态性对身体测量性状的影响
在这两个品种中，除了白富拉尼的臀部长度外，所有测量的性状基因型之间都存在显着差异（表 5）。
1) 白富拉尼
与白富拉尼的 CC 相比，基因型 GG 和 GC 的心脏周长、枯萎高度和胸部深度的平均值显着（p < 0.05）更高。三种基因型之间存在显着差异（P < 0.001），体长分别从 CC 到 GC 和 GG 增加。臀部长度的平均值在基因型之间没有显着差异（P > 0.05）。
2) 穆图鲁
在 Muturu 人群中，体长、心脏周长和枯萎高度的平均值显着增加（P < 0.001），并且从 CC 到 GC 和 GG 基因型逐渐增加。与不同基因型的臀部长度没有显着差异的 White Fulani 不同，GG 基因型的臀部长度显着（P < 0.001）高于 GC 和 CC。臀部长度的平均值 GC 和 CC 没有显着差异（P < 0.05）。对于胸部深度，GG基因型的值显着（P < 0.05）高于CC，但GG和GC没有显着差异。
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | ||
| 抄送 | GC | GG | |||
| WF (37) | 提单 | 130.52 ℃ ±0.94 | 134.46 b ± 0.77 | 142.68 ± 2.49 | <0.001 |
| HG | 172.72 b ± 1.31 | 177.52 ± 1.07 | 178.62 ± 3.48 | 0.02 | |
| WH | 143.74 b ± 1.20 | 148.25 ± 0.98 | 151.92 ± 3.18 | 0.008 | |
| 强化学习 | 50.88 ± 1.12 | 53.31±0.91 | 57.16 ± 2.96 | 0.084 | |
| 光盘 | 70.95 b ± 1.25 | 76.19 ± 1.02 | 78.43 ± 3.30 | 0.005 | |
| 穆特 (36) | 提单 | 99.00 ℃ ±0.59 | 102.51 b ± 0.48 | 105.20 ± 0.49 | <0.001 |
| HG | 125.57 ℃ ±0.56 | 128.10 b ± 0.45 | 130.91 ± 0.46 | <0.001 | |
| WH | 81.54 ℃ ±0.57 | 83.11 b ± 0.45 | 85.64 ± 0.47 | <0.001 | |
| 强化学习 | 36.05 b ± 0.36 | 36.78 b ± 0.29 | 38.25 ± 0.30 | <0.001 | |
| 光盘 | 54.91 b ± 0.46 | 55.75 抗体± 0.37 | 56.41 ± 0.38 | 0.049 | |
表 5。SMO9基因的 G21234C SNP 基因型与白富拉尼牛和穆图鲁牛身体测量性状的关联。
abc行内具有不同上标的均值显着不同（p < 0.05 或 0.001）。WF，白富拉尼；穆图，穆图鲁；BL，体长；HG，心围；WH，凋谢高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。
3.3.3. SMO 外显子 11
对 77 头牛进行了 319 bp 的SMO外显子 11 基因扩增和测序。Geneious Prime（2019.2版）软件[ 22 ]用于分析序列图。Zhang等人报道的两个SNP-C22424T和C22481T 。[ 7 ] 分别导致甘氨酸和组氨酸的同义取代，被确定。该软件允许鉴定纯合和杂合基因型携带者。
对于 C22424T 突变，在所检查的两个牛品种中发现了两种基因型（CC 和 TT）（图 3），而对于 C22481T 突变，白富拉尼个体具有两种基因型（CC 和 CT），而所有 Muturu 牛都是纯合的C 等位基因（图 4）。
计算每个品种的等位基因和基因型频率（表 6）。对于 C22424T 多态性，两种牛品种的等位基因和基因型分布存在相似性。76% 和 77% 的牛群分别在 White Fulani 和 Muturu 品种中具有 CC 基因型。对于 C22481T SNP，86% 的白富拉尼牛具有 CC 基因型，而所有 Muturu 牛都具有 CC 基因型（表 6）。所有基因型频率均未偏离 Hardy-Weinberg 平衡。
3.3.4。SMO外显子 11 C22424T SNP 对身体测量特征的影响
1) 白富拉尼
对于除体长外测量的所有身体测量性状，在两种基因型（CC 和 TT）之间观察到显着差异（P < 0.05）（补充表 S1）。差异有利于CT基因型。
图 3。序列图显示SMO外显子 11 基因中的 C22424T 突变。
图 4。序列图显示SMO外显子 11 基因中的 C22481T 突变。
| 品种 | 基因型频率 | 全部的 | 等位基因频率 | HWE (χ 2 ) | P值 | ||
| C22424TSNP | |||||||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | C | 吨 | ||||
| WF | 0.76 (28) | 0.24 (9) | 37 | 0.88 | 0.12 | 0.159 | 0.690 |
| 穆特 | 0.77 (30) | 0.30 (9) | 39 | 0.88 | 0.12 | 0.157 | 0.692 |
| C22481TSNP | |||||||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | C | 吨 | ||||
| WF | 0.86 (32) | 0.14 (5) | 37 | 0.93 | 0.07 | 0.000 | 1.000 |
| 穆特 | 1.00 (38) | 0.00 (0) | 39 | 1.00 | 0.00 | 0.000 | 1.000 |
表 6。Muturu 和白富拉尼牛SMO外显子 11 多态性的等位基因和基因型频率
WF：White Fulani，MUT：Muturu，频率。频率，HWE：Hardy-Weinberg 平衡。
2) 穆图鲁
仅在体长和胸深方面观察到显着差异（P < 0.05）（补充表 S1）。CT基因型动物的平均体长和胸深明显高于CC基因型动物。
3.3.5。SMO外显子 11 C22481T SNP 对身体测量特征的影响
在白色富拉尼品种中，在本研究中测量的所有身体测量性状中，两种基因型之间未观察到显着（P > 0.05）差异（补充表 S2）。所有 Muturu 牛都携带相同的 CC 基因型。
3.3.6。SMO 外显子 12
对 55 头牛进行了SMO基因外显子 12 的扩增和测序。使用Geneious Prime软件（2019.2版）[ 22 ]进行序列图谱分析，鉴定出T22939C SNP[ 6 ]。通过直接测序对所有动物的多态性进行基因分型，在两个牛品种中都发现了三种基因型——CC、CT 和 TT（图 5）。
计算每个品种的等位基因和基因型频率（表 7）。在 White Fulani，70% 的牛具有 CC 基因型，27% 具有杂合 CT，而只有一只动物具有纯合 TT。相反，28% 的 Muturu 牛群携带纯合 TT，32% 携带 CC 基因型，而 40% 携带杂合 CT。因此，与白色富拉尼 (17%) 相比，T 等位基因在 Muturu 品种 (48%) 中更常见。所有基因型频率均未偏离 Hardy-Weinberg 平衡。
3.3.7。SMO外显子 12 T22939C SNP 对身体测量特征的影响
1) 白富拉尼
体长和枯高的基因型间存在显着差异（P < 0.05）。与CC基因型相比，CT基因型的体长和枯萎高度的平均值显着（P <0.05）更高。然而，TT 和 CT 基因型没有显着差异（补充表 S3）。对于测量的所有其他性状，三种基因型之间没有观察到显着差异。
2) 穆图鲁
对于除胸部深度以外的所有性状，TT 基因型牛的平均值最高（P ≤ 0.001），CT 次之，CC 基因型牛的平均值最低（补充表 S3）。
图 5。序列图显示SMO外显子 12 基因中的 T22939C 突变。
| 品种 | 基因型频率 | 全部的 | 等位基因频率 | HWE (χ 2 ) | P值 | |||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | TT | C | 吨 | ||||
| WF | 0.70 (26) | 0.27 (10) | 0.03 (1) | 37 | 0.83 | 0.17 | 0.000 | 1.000 |
| 穆特 | 0.32 (12) | 0.40 (16) | 0.29 (11) | 39 | 0.52 | 0.48 | 1.644 | 0.439 |
表 7。Muturu和White Fulani牛SMO外显子12基因T22939C SNP的等位基因和基因型频率
WF：White Fulani，MUT：Muturu，频率。频率，HWE：Hardy-Weinberg 平衡。
3.3.8. SMO 3' 非翻译区 (3'UTR)
对 76 头牛的SMO基因的 3' UTR 区域进行了扩增和测序。使用 Geneious Prime 软件（2019.2 版）[ 22 ] 完成序列作图和基因型鉴定。[ 6 ]报道的两个 SNP——C23329T 和 T23458G——在被检查的牛群中被鉴定出来。
对于每个 SNP，发现了三种基因型。CC、CT 和 TT；C23329T 和 T23458G SNP 分别存在 TT、TG 和 GG 基因型（图 6和图 7）。
在两个品种中，两个SMO 3'UTR SNP的等位基因和基因型分布相似。在 C23329T 中，C 等位基因占主导地位，在 White Fulani 和 Muturu 中的发生频率分别为 92% 和 91%。每个品种只有一只动物携带 TT 纯合子（表 8）。对于 T23458G SNP，T 和 G 等位基因在两个品种中都很突出；T 等位基因分别发生在 53% 和 57% 的白富拉尼牛和穆图鲁牛中（表 8）。所有基因型频率均未偏离 Hardy-Weinberg 平衡。
图 6。序列图显示SMO 3UTR 区域中的 C23329T 突变。
| 品种 | 基因型频率 | 全部的 | 等位基因频率 | HWE (χ 2 ) | P值 | |||
| C23329T 单核苷酸多态性 | ||||||||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | TT | C | 吨 | ||||
| WF | 0.87 (34) | 0.10 (4) | 0.03(1) | 39 | 0.92 | 0.08 | 0.230 | 0.891 |
| 穆特 | 0.84 (31) | 0.14 (5) | 0.03(1) | 37 | 0.91 | 0.09 | 0.200 | 0.905 |
| T23458G SNP | ||||||||
| TT | TG | GG | 吨 | G | ||||
| WF | 0.34 (13) | 0.37 (14) | 0.29 (11) | 38 | 0.53 | 0.47 | 1.697 | 0.428 |
| 穆特 | 0.40 (14) | 0.34 (12) | 0.26 (9) | 35 | 0.57 | 0.43 | 3.304 | 0.192 |
表 8。Muturu 和白富拉尼牛SMO 3'UTR 多态性的等位基因和基因型频率
WF：White Fulani，MUT：Muturu，频率。频率，HWE：Hardy-Weinberg 平衡。
图 7。序列图显示SMO 3'UTR 区域中的 T23458G 突变。
3.3.9。SMO 3'UTR C23329T SNP 对身体测量特征的影响
在两个品种中，所有身体测量性状的三个基因型之间没有发现显着（P > 0.05）差异（补充表S4）。
3.3.10。SMO 3'UTR T23458G SNP 对身体测量特征的影响
与在 C23329T SNP 中获得的无效应相反，T23458G SNP 的基因型之间存在显着差异。
1) 白富拉尼
不同基因型的体长和凋谢高度的平均值存在显着差异（P < 0.01 或 P < 0.05）。TT 和 TG 的值相似，但在体长和肩高方面显着大于 GG 的值（补充表 S5）。在测量的所有其他性状中，三种基因型之间没有发现显着差异。
2) 穆图鲁
除胸部深度外，所有身体测量性状的基因型之间均存在显着差异（P <0.01）。与具有 GG 基因型的牛相比，具有 TT 基因型的牛的体长、心围、枯萎高度和臀部长度的平均值显着（P < 0.01）更高（补充表 S5）。
3.4. LMF 1 外显子 4 T27154C SNP 对身体测量特征的影响
使用上面列出的引物， LMF 1 外显子 4 的307-bp覆盖了 Ren等人报道的 T27154C 多态性位点。[ 10 ] 在中国牛中对 74 头非洲牛进行了扩增和测序。使用 Geneious 软件（2019.2 版）进行序列分析。在 T27154C 突变点，仅发现纯合 T 等位基因（图 8）。在本研究中检查的 White Fulani (38) 和 Muturu (36) 种群中，所有动物都具有固定的 T 等位基因，TT 的基因型频率为 1.0。
图 8。序列图显示LMF 1 外显子 4 区域不存在 T27154C 突变。
4。讨论
4.1。回归方程
回归的所有性状的决定系数 (R 2 ) 值
除了白色富拉尼人的臀部长度和胸部深度分别为 73% 和 64% 外，年龄均为阳性且高于 80%。这表明，与 Muturu 品种不同，年龄差异仅占白富拉尼牛臀部长度和胸部深度变化的相对较小的组成部分。在牛品种之间观察到的这种差异可能是品种与品种在测量性状形状上的差异的结果。伯格等人。[ 23 ] 注意到第一根肋骨的曲率，在测量胸部深度的地方，因品种而异。据报道，不同品种的臀部形状存在差异。虽然牛磺酸品种的臀部肌肉发达且更水平 [ 24 ]，但白色富拉尼臀部从钩骨到针骨轻轻向下倾斜 [ 25 ]]。一般而言，回归方程可用于对具有中等至高度置信度的身体测量特征值进行预测。这与 [ 26 ] 的研究结果一致，其中牛的年龄显着解释了 Muturu 和白富拉尼牛的线性身体测量值（体长、凋谢高度、心脏周长）的差异。Bene [ 27 ] 还报告了九个牛品种的动物年龄和身体测量特征之间的中等相关性（高达 0.46）。
4.2. 白富拉尼和穆图鲁的 t 检验比较值
与 Muturu 相比，White Fulani 的所有身体测量特征的平均值显着更高。这并不意外，因为这两种牛品种的体型差异很大，有据可查。Udeh [ 28 ] 报告说，在 P < 0.01 时，瘤牛品种的身体测量特征（心围、肩高和体长）显着大于 Muturu。在 [ 26 ]进行的研究中，与 Muturu 相比，White Fulani 的身体测量值——活重、头长、头宽、体长、高度和心脏周长——显着（P < 0.05）更大。
4.3. SMO多态性及其与身体测量特征 (BMT) 的关联
由于它与其他牛品种中的 BMT [6、7] 相关，因此在白富拉尼和 Muturu 品种中研究了SMO基因。没有研究试图对此进行调查。
4.4. SMO 9 多态性及其与 BMT 的关联
尽管具有不同的等位基因和基因型分布，但在研究的两个品种中都发现了牛SMO外显子 9 中的 G21234C SNP 。G 等位基因在 Muturu (56%) 中的出现率高于 White Fulani 中的 34%。与[ 7 ]的研究结果一致，关联分析表明，G21234C 多态性影响两个品种的体长、心围、凋谢高度和胸深。它也与 Muturu 的臀部长度有关，但与白富拉尼牛无关。SMO的影响不显着如上所述，在 White Fulani 观察到的关于臀部长度的 9 可能与年龄回归臀部长度时获得的相对较低的回归系数无关。从关联结果来看，G等位基因和GG纯合基因型有利于选择改善两个品种的身体测量性状。在这两个品种中，GG 基因型在某些身体测量性状（BL、HG、WH 和 CD）上均优于 CC。在 Muturu 中，纯合 GG 基因型的平均值显着高于（P < 0.05）杂合 GC 基因型，除胸部深度外，所有性状均高于 White Fulani，其中 GG 和 GC 基因型的平均值对于这些性状没有显着差异。7 . 同样重要的是要注意 GG 基因型在所研究的白富拉尼人群中只出现了两次。这种低 GG 基因型可能是由于本研究使用的样本量小。总之，这一发现表明，遗传改良计划应侧重于使用选择来增加人群中的 G 等位基因。
据[ 7 ]报道]，G21234C SNP 导致精氨酸的同义取代，从而不改变翻译蛋白质的氨基酸序列。预计这不会改变 SMO 蛋白的功能。然而，SNP 对观察到的身体测量特征的影响可以用密码子偏倚来解释。这种密码子 (G/C) 的变化虽然不影响氨基酸序列，但可能会影响从基因翻译到蛋白质的时间 [29, 30]，从而改变蛋白质的功能和结构。这可能是影响 mRNA 翻译成 SMO 蛋白的情况，进而影响了刺猬信号的传递。也有报道称，通过与 RNA 结合蛋白的相互作用，这种沉默突变可以对翻译后基因表达产生调节作用 [31, 32]。此外，33 ]。
4.5. SMO外显子 11 多态性及其与 BMT 的关联
4.5.1。G222424T
研究的白富拉尼和穆图鲁牛群有两种基因型——CC 和 CT。两个品种均不存在纯合TT。在秦川牛中，[ 7 ]发现了所有可能的三种基因型。本研究中缺乏 TT 基因型可能是由于样本量小。统计分析显示，在具有 CT 基因型的牛中，White Fulani 的四个 BMT（心周长、凋谢高度、臀部长度和胸深）和 Muturu 的两个 BMT（体长和胸深）的平均值显着 (P < 0.05)与具有TT基因型的人相比。这一发现与 [ 7] 与 CC 和 TT 基因型的牛相比，具有 CT 基因型的牛的身体测量性状平均值显着更高。尽管 C > T SNP 仅导致 SMO 蛋白中的同义甘氨酸突变，但研究表明，如上文在SMO外显子 9 多态性中所解释的，这种突变也会影响蛋白质功能和结构。看起来杂合的 CT 基因型有利于品种中优越的身体测量性状。因此，应制定有意识的选择和育种计划，以增加这种基因型在 Muturu 和白富拉尼牛群中的频率。
4.5.2. C22481T
在 White Fulani，发现 CC 和 CT 基因型，CC 的发生频率更高。TT基因型与秦川牛一样不存在[ 7 ]。在 Muturu 牛中仅发现 CC 基因型。这代表了所研究的白富拉尼牛和穆图鲁牛种群之间的明显区别。Muturu 牛缺乏 T 等位基因可能是由于样本量小，或者该品种没有发生 C22481T 突变。正如 [ 7 ]所指出的，该突变导致了同义的组氨酸取代。White Fulani 的关联研究表明，对于所有身体测量特征，CC 和 CT 基因型之间不存在显着 (P > 0.05) 差异。这个结果与 [ 7] C22481T 多态性不影响身体测量性状。提供的一个合理解释是 CC 和 CT 基因型对 mRNA 翻译成 SMO 蛋白以及对蛋白质结构的影响是相等的。因此，该 SNP 不能用于标记辅助选择。
4.6. SMO外显子 12 T22939C 多态性及其与 BMT 的关联
在 Muturu 和 White Fulani 品种的 C22939T SNP 中鉴定出三种基因型——CC、CT 和 TT。白富拉尼和穆图鲁品种的 T 等位基因频率分别为 17% 和 48%。Muturu 的 TT 基因型频率为 28%，而 White Fulani 的 TT 基因型频率为 3%，这说明了 Muturu 牛群中 T 等位基因的相对丰度。统计分析显示，与 CC 基因型相比，携带 CT 和 TT 基因型的白富拉尼牛的体长和凋谢高度的平均值显着（P < 0.05）更大。在 Muturu，TT 基因型个体的平均值非常显着 (P < 0.001) 大于 CC 和 CT 基因型个体的所有身体测量特征（胸部深度除外）。综合起来，似乎增加人群中 T 等位基因频率的选择将有利于获得优越的身体测量特征。在秦川品种研究[6 ]，与具有 T 等位基因的牛相比，具有 C 等位基因的牛具有显着 (P < 0.05) 较低的体型特征。张等人。[ 6 ] 报道这种 T > C 多态性导致牛SMO蛋白c 末端的非同义丝氨酸取代脯氨酸氨基酸。在没有突变的情况下，SMO 蛋白的激活是由蛋白 c 末端的丝氨酸-苏氨酸残基的磷酸化触发的 [ 34]。将丝氨酸替换为脯氨酸将不允许磷酸化，这将不可避免地使 SMO 蛋白失活。因此，这种蛋白质失活可能是具有 C 等位基因的牛具有较低身体测量特征的基础。该蛋白是一种膜信号转导蛋白，通过hedgehog信号通路在骨形成和脂肪生成的控制中发挥作用[ 4 ]。
4.7. SMO 3'UTR 多态性及其与 BMT 的关联
4.7.1. C23329T
检查的白富拉尼和穆图鲁牛群具有 CC、CT 和 TT 基因型。两个品种的等位基因和基因型分布相似，C 等位基因占主导地位（白富拉尼和穆图鲁品种分别为 92% 和 91%）。纯合 TT 仅出现在每个品种的一只采样动物中。这表明这种 C > T 突变并未在尼日利亚的白富拉尼牛和穆图鲁牛中广泛传播。统计分析表明，在两个品种中，该 SNP 的三个基因型之间不存在显着（P > 0.05）差异。这一结果与张等人在中国秦川牛身上观察到的结果不一致。[ 6]。秦川牛与TT基因型动物相比，CC基因型动物具有显着（P < 0.05）更大的体尺特征。这里没有这种 SNP 对身体测量特征的影响可能是由于在所检查的两个品种中 T 等位基因的出现频率非常低。也可能是这种 SNP 对尼日利亚白富拉尼和穆图鲁品种的身体测量特征没有影响，因此不能作为牛选择的分子标记。最佳实践是使用该品种的大量种群来检查标记对该品种的影响，因为在使用不同品种的不同研究之间发现不一致的情况并不罕见 [ 35 ]。因此，需要更大的样本量来确认该结果的真实性。
4.7.2. T23458G
与在 C23329T SNP 中发现的一个等位基因的优势相反， SMO 3'UTR的 T23458G SNP 的 T 和 G 等位基因在两个品种中都有明显的出现。白富拉尼和穆图鲁的 T 等位基因频率分别为 53% 和 57%。这表明SMO的 3'UTR 区域的 T > G 突变已在两个品种中完全建立。此外，与 C23329T SNP 的无影响相反，T23458G SNP 对两种牛品种的身体测量特征都有显着影响。在 White Fulani，与 CC 基因型相比，TT 基因型个体的体长和枯萎高度的平均值显着 (P < 0.05)。同样，TT 基因型 Muturu 牛的体长、心围、凋谢高度和臀部长度显着 (P < 0.01) 高于 CC 基因型。总之，增加人群中的 T 等位基因以实现卓越的身体测量特征将是有益的。可以说，由于该 SNP 位于基因的非编码区，因此通常不应影响蛋白质功能。然而，研究表明，3'UTR 区域的突变可能会影响基因表达模式。[36, 37] 是研究表明 3'UTR 序列突变对基因表达模式有积极影响的例子。Stachowiak 等人。[图37 ]显示PPRA基因3'UTR区域的突变影响基因的转录水平，随后对猪的脂肪组织积累产生显着影响。
4.7.3. LMF 1 多态性及其与 BMT 的关联
对 T27154C SNP 进行研究的两个品种中的所有动物都是单态的，并且对于 T 等位基因是纯合的。任等人。[ 10 ] 已将此 SNP 与中国南阳牛的体型联系起来。似乎尼日利亚牛——牛磺酸和牛磺酸——在突变位点是单态的，或者遗传漂变导致了这种变异的丧失。在[ 10 ]筛选的中国荷斯坦牛品种中，所有动物在27154 T>C位点的T等位基因也是单态纯合的。任等人。[ 10] 提供了一个解释，即 C > T 多态性的 C 等位基因可能仅存在于肉牛品种中，因为在突变位点不具有多态性的中国荷斯坦牛是所检查的四个牛品种中唯一的奶牛品种. 由于 Muturu 和 White Fulani 牛没有被专门化，因此很难对这项研究的结果做出相同的解释。总体而言，根据本研究的结果表明两个品种都缺乏多态性，LMF 1 外显子 4 突变与这些品种的生长性状无关，因此不能用于标记辅助选择。然而，这一结论仅限于本研究的结果；在得到证实或反驳之前，还需要进一步的研究。
5. 结论
在这项研究中，我们展示了白富拉尼牛和穆图鲁牛品种中SMO基因多态性的证据。此外，我们报告 G21234C、C22424T、T22939C 和 T23458G 基因座的变异显着影响两种牛品种的 BMT。然而，有证据表明两种非洲牛品种中不存在LMF 1 多态性。
致谢
我要感谢英联邦奖学金委员会和阿伯里斯特威斯大学，他们为我在进行研究的阿伯里斯特威斯大学的理学硕士学位提供了赞助。我还要感谢我的主管 Matthew Hegarty 博士指导我完成这些过程。我感谢 Oladiti Ridwan 先生、Moibi Adeyemi、Adeniyi Abdul-Ganiy 和 Amune Jeremiah 在执行实地工作期间提供的帮助。
作者贡献
MJ Hegarty 监督了整个过程。Ridwan Olawale Ahmed 设计了实验，进行了实验室工作，进行了统计分析。Ridwan Olawale Ahmed 和 Ibrahim Shu'aibu 撰写了手稿。Semiu Folaniyi Bello 收集了牛的鼻拭子和形态学数据的现场数据。所有作者都阅读并批准了手稿。
补充数据
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | |
| 抄送 | 电脑断层扫描 | |||
| WF (37) | 提单 | 133.44±0.83 | 134.51 ± 1.47 | 0.533 |
| HG | 175.00 ± 0.98 | 179.12 b ± 1.74 | 0.047 | |
| WH | 145.36 ± 0.87 | 149.85 b ± 1.54 | 0.016 | |
| 强化学习 | 51.78 ± 0.78 | 55.47 b ± 1.37 | 0.025 | |
| 光盘 | 73.12 ± 0.94 | 78.06 b ± 1.65 | 0.013 | |
| 穆特 (39) | 提单 | 101.98 ± 0.51 | 104.45 b ± 0.94 | 0.026 |
| HG | 128.27±0.48 | 129.21±0.88 | 0.349 | |
| WH | 83.38 ± 0.43 | 84.12±0.78 | 0.414 | |
| 强化学习 | 36.91 ± 0.31 | 37.77 ± 0.56 | 0.190 | |
| 光盘 | 55.48 ± 0.25 | 56.80 b ± 0.45 | 0.015 | |
表 S1。SMO外显子 11 基因的 C22424T SNP 基因型与白富拉尼牛和穆图鲁牛身体测量性状的关联。
ab行内具有不同上标的均值显着不同（p < 0.05）。WF，白富拉尼；穆图，穆图鲁；BL，体长；HG，心围；WH，枯萎高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | |
| 抄送 | 电脑断层扫描 | |||
| WF (37) | 提单 | 133.93±0.78 | 132.24 ± 1.97 | 0.429 |
| HG | 176.07 ± 0.96 | 174.44 ± 2.42 | 0.535 | |
| WH | 146.41±0.87 | 146.96 ± 2.25 | 0.823 | |
| 强化学习 | 52.60 ± 0.78 | 52.70 ± 1.98 | 0.964 | |
| 光盘 | 74.29 ± 0.96 | 73.84 ± 2.43 | 0.863 | |
表 S2。SMO外显子 11 基因C22481T SNP 基因型与白富拉尼牛身体测量性状的关联。
同一行内的所有平均值均无显着差异（P > 0.05）。WF，白富拉尼；BL，体长；HG，心围；WH，凋谢高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | ||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | TT | |||
| WF (37) | 提单 | 131.86 ± 0.72 | 135.78 b ± 1.18 | 133.24 ab ± 3.34 | 0.031 |
| HG | 174.04 ± 0.90 | 176.54 ± 1.46 | 182.66±4.12 | 0.076 | |
| WH | 144.67 ± 0.86 | 149.23 b ± 1.40 | 147.56 抗体± 3.94 | 0.031 | |
| 强化学习 | 51.40 ± 0.57 | 53.13±0.92 | 49.78 ± 2.59 | 0.221 | |
| 光盘 | 72.58±0.88 | 76.53 ± 1.43 | 79.24 ± 4.04 | 0.096 | |
表 S3。SMO外显子 12 基因的 T22939C SNP 基因型与白富拉尼牛和穆图鲁牛身体测量性状的关联。
abc行内具有不同上标的均值显着不同（p < 0.05 或 0.001）。WF，白富拉尼；穆图，穆图鲁；BL，体长；HG，心围；WH，凋谢高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | ||
| 抄送 | 电脑断层扫描 | TT | |||
| WF (39) | 提单 | 134.02 ± 0.73 | 130.46±2.12 | 126.80 ± 4.24 | 0.094 |
| HG | 176.23±0.92 | 173.07 ± 2.68 | 172.45a ± 5.35 | 0.445 | |
| WH | 147.12±0.84 | 143.24 ± 2.45 | 145.70 ± 4.89 | 0.330 | |
| 强化学习 | 52.78±0.74 | 50.77 ± 2.16 | 55.10 ± 4.31 | 0.578 | |
| 光盘 | 74.25±0.91 | 72.71 ± 2.65 | 78.55 ± 5.29 | 0.612 | |
| 穆特 (37) | 提单 | 102.79 ± 0.59 | 100.60 ± 1.32 | 102.28 ± 2.96 | 0.319 |
| HG | 128.89 ± 0.46 | 126.44 ± 1.15 | 125.70 ± 2.76 | 0.095 | |
| WH | 83.80 ± 0.40 | 82.43 ± 0.99 | 81.36 ± 2.22 | 0.283 | |
| 强化学习 | 37.17 ± 0.24 | 36.56±0.60 | 36.50 ± 1.33 | 0.591 | |
| 光盘 | 54.91±0.26 | 55.18±0.64 | 55.12±1.44 | 0.522 | |
表 S4。SMO 3'UTR 区域的 C23329T SNP 基因型与白富拉尼牛和穆图鲁牛身体测量性状的关联。
| 品种 | 性状（以厘米为单位的平均值±SE） | 基因型 | P值 | ||
| TT | TG | GG | |||
| 女足 (38) | 提单 | 135.67 ± 1.03 | 134.67 ± 0.99 | 129.81 b ± 1.12 | 0.001 |
| HG | 177.42 ± 1.43 | 176.77 ± 1.38 | 172.71 ± 1.55 | 0.07 | |
| WH | 147.75 ± 1.26 | 148.53 ± 1.21 | 143.27 b ± 1.39 | 0.017 | |
| 强化学习 | 53.57 ± 1.20 | 53.06 ± 1.15 | 51.20 ± 1.30 | 0.352 | |
| 光盘 | 75.46 ± 1.41 | 75.30 ± 1.35 | 71.22±1.53 | 0.086 | |
| 穆特 (35) | 提单 | 104.65 ± 0.61 | 102.19 b ± 0.66 | 100.37 b ± 0.76 | < 0.001 |
| HG | 130.28 ± 0.59 | 128.38 b ± 0.64 | 126.33 ℃ ±0.74 | 0.001 | |
| WH | 85.07 ± 0.52 | 83.01 b ± 0.56 | 81.90 b ± 0.64 | 0.001 | |
| 强化学习 | 37.81 ± 0.31 | 37.13 ± 0.34 | 36.04 b ± 0.30 | 0.005 | |
| 光盘 | 56.26±0.38 | 55.83 ± 0.41 | 55.15±0.47 | 0.195 | |
表 S5。SMO 3'UTR 区域的 T23458G SNP 基因型与白富拉尼牛和穆图鲁牛身体测量性状的关联。
| 序列号 | 年龄 | 提单 | A-BL | HG | A-HG | WH | A-WH | 强化学习 | 强化学习 | 光盘 | 光盘 |
| 1 | 23 | 130 | 136.56 | 170 | 177.29 | 136 | 144.64 | 47 | 51.22 | 69 | 73.31 |
| 2 | 24 | 132 | 132 | 171 | 171 | 140 | 140 | 51 | 51 | 72 | 72 |
| 3 | 23 | 127 | 133.56 | 168 | 175.29 | 137 | 145.64 | 48.3 | 52.52 | 73 | 77.31 |
| 4 | 19 | 100 | 132.8 | 138.4 | 174.85 | 103 | 146.2 | 34.5 | 55.6 | 52 | 73.55 |
| 5 | 19 | 96 | 128.8 | 130 | 166.45 | 100 | 143.2 | 32 | 53.1 | 49 | 70.55 |
| 6 | 21 | 110 | 129.68 | 151 | 172.87 | 117 | 142.92 | 36 | 48.66 | 53 | 65.93 |
| 7 | 20 | 107 | 133.24 | 150 | 179.16 | 110 | 144.56 | 32 | 48.88 | 61 | 78.24 |
| 8 | 19 | 98 | 130.8 | 137 | 173.45 | 102 | 145.2 | 33 | 54.1 | 55 | 76.55 |
| 9 | 22 | 120 | 133.12 | 160 | 174.58 | 130 | 147.28 | 46 | 54.44 | 62 | 70.62 |
| 10 | 20 | 109 | 135.24 | 150 | 179.16 | 112 | 146.56 | 35 | 51.88 | 53 | 70.24 |
| 11 | 20 | 104 | 130.24 | 144.6 | 173.76 | 106 | 140.56 | 30 | 46.88 | 61 | 78.24 |
| 12 | 19 | 113 | 145.8 | 142.5 | 178.95 | 109 | 152.2 | 36 | 57.1 | 56 | 77.55 |
| 13 | 23 | 120 | 126.56 | 165.7 | 172.99 | 138 | 146.64 | 49 | 53.22 | 69 | 73.31 |
| 14 | 20 | 107 | 133.24 | 153.5 | 182.66 | 113 | 147.56 | 32.9 | 49.78 | 62 | 79.24 |
| 15 | 19 | 98 | 130.8 | 140 | 176.45 | 103 | 146.2 | 36.8 | 57.9 | 54 | 75.55 |
| 16 | 20 | 110 | 136.24 | 146.5 | 175.66 | 113 | 147.56 | 34.2 | 51.08 | 54 | 71.24 |
| 17 | 23 | 128 | 134.56 | 168 | 175.29 | 139 | 147.64 | 48.5 | 52.72 | 73.5 | 77.81 |
| 18 | 24 | 133 | 133 | 172 | 172 | 145 | 145 | 53 | 53 | 69 | 69 |
| 19 | 23 | 123 | 129.56 | 176 | 183.29 | 142 | 150.64 | 50 | 54.22 | 69 | 73.31 |
| 20 | 20 | 117 | 143.24 | 167 | 196.16 | 130 | 164.56 | 55 | 71.88 | 78 | 95.24 |
| 21 | 21 | 118 | 137.68 | 153 | 174.87 | 127 | 152.92 | 37 | 49.66 | 64 | 76.93 |
| 22 | 22 | 123 | 136.12 | 166.8 | 181.38 | 129 | 146.28 | 45 | 53.44 | 66 | 74.62 |
| 23 | 20 | 112 | 138.24 | 151 | 180.16 | 114 | 148.56 | 35 | 51.88 | 56 | 73.24 |
| 24 | 22 | 122 | 135.12 | 166 | 180.58 | 130 | 147.28 | 47 | 55.44 | 65 | 73.62 |
| 25 | 22 | 119 | 132.12 | 158.5 | 173.08 | 135 | 152.28 | 42 | 50.44 | 64 | 72.62 |
| 26 | 23 | 122 | 128.56 | 165.2 | 172.49 | 135 | 143.64 | 49 | 53.22 | 72.5 | 76.81 |
| 27 | 19 | 94 | 126.8 | 136 | 172.45 | 102.5 | 145.7 | 34 | 55.1 | 57 | 78.55 |
| 28 | 21 | 119 | 138.68 | 156 | 177.87 | 126 | 151.92 | 38 | 50.66 | 65 | 77.93 |
| 29 | 22 | 124 | 137.12 | 158 | 172.58 | 126 | 143.28 | 43 | 51.44 | 65 | 73.62 |
| 30 | 23 | 133 | 139.56 | 171 | 178.29 | 143 | 151.64 | 53 | 57.22 | 75 | 79.31 |
| 31 | 23 | 127 | 133.56 | 167 | 174.29 | 136 | 144.64 | 51.5 | 55.72 | 71 | 75.31 |
| 32 | 21 | 116 | 135.68 | 158 | 179.87 | 130 | 155.92 | 38.6 | 51.26 | 64 | 76.93 |
| 33 | 20 | 104 | 130.24 | 148.5 | 177.66 | 104 | 138.56 | 32 | 48.88 | 48 | 65.24 |
| 34 | 20 | 106 | 132.24 | 146 | 175.16 | 112 | 146.56 | 29 | 45.88 | 54 | 71.24 |
| 35 | 19 | 92 | 124.8 | 135 | 171.45 | 101 | 144.2 | 30 | 51.1 | 47 | 68.55 |
| 36 | 20 | 105 | 131.24 | 145 | 174.16 | 107 | 141.56 | 31 | 47.88 | 48 | 65.24 |
| 37 | 20 | 102 | 128.24 | 146.5 | 175.66 | 110 | 144.56 | 34.5 | 51.38 | 58 | 75.24 |
| 38 | 20 | 107 | 133.24 | 132.5 | 161.66 | 103 | 137.56 | 31 | 47.88 | 50 | 67.24 |
| 39 | 19 | 106 | 138.8 | 139 | 175.45 | 102 | 145.2 | 33 | 54.1 | 51 | 72.55 |
| 40 | 19 | 102 | 134.8 | 137 | 173.45 | 105 | 148.2 | 31 | 52.1 | 52 | 73.55 |
(a) 月龄，所有性状均以厘米、BL、体长为单位；HG，心围；WH，枯萎高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。带有前缀“A”的特征代表 24 个月的调整值。
(b) 月龄，所有性状均以厘米、BL、体长为单位；HG，心围；WH，枯萎高度；RL，臀部长度；CD，胸部深度。带有前缀“A”的特征代表 24 个月的调整值。
（一个）
表 S6。(a) 白富拉尼从实地获得的原始数据和 24 个月调整后的数据；(b) 从实地获得的原始数据和 Muturu 的 24 个月调整数据。
利益冲突
作者声明与本文的发表没有利益冲突。
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